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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
3.5.1.1. Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique théorique en g/L d’eau purifiée du milieu urée-indole est :
L-Tryptophane......................................................................................... 3
Phosphate monopotassique...................................................................
1
Phosphate bipotassique.......................................................................... 1
Chlorure de sodium .............................................................................. 5
Urée ........................................................................................................ 20
Rouge de phénol....................................................................................
0,025
Alcool à 95°........................................................................................... 0,01mL
pH 6,7
Ce milieu est disponible en tubes de 10 mL prêts à l’emploi.
Répartir le milieu urée-indole en tubes à hémolyse, vides, stériles, à raison de
1 mL par tube.
3.5.1.2. Ensemencement et incubation du milieu
Réaliser une suspension du germe à tester dans 1 mL d’eau déminéralisée stérile, puis ensemencer dans deux tubes à hémolyse de milieu urée indole une
goutte de cette suspension. 11 faut préparer obligatoirement deux tubes par souche bactérienne à étudier.
Incuber les tubes à l'étuve à 37 °C pendant 24 heures.
3.5.1.3. Lecture et interprétation du milieu
Sur le milieu urée-indole, les entérobactéries peuvent dégrader :
- l’urée si elles possèdent l’enzyme uréase (cf. supra, paragraphe 3.4.) ;
- le L-tryptophane si elles possèdent une tryptophanase (test indole, cf. supra.
paragraphe 3.3.1.) ou une tryptophane désaminase (test TDA).
Dans ce dernier cas, la désamination de cet acide aminé conduit à la production d ammoniaque et d’acide indole-3 pyruvique, qui est révélé par l'apparition
d une couleur brune en présence d’une solution de perchlorure de fer.
La lecture des trois tests (avec addition éventuelle de réactifs) et l’interprétation de ce milieu sont détaillées dans le tableau 72.
Tableau 72 ■ Lecture et interprétation du milieu urée-indole.
I-ccture directe sur les deux tubes à hémolyse après incubation
Test uréase
Milieu rouge violacé
(alcalin) après incubation
Uréase+
Milieu orange (couleur du milieu)
UréaseAddition de réactifs puis lecture
1" tube à hémolyse :
test indole
Coloration rouge en surface
(anneau rouge)
Indole+
Ajouter du réactif de Kovacs (4 à 5 gouttes)
Coloration jaune en surface
IndoleY tube a hémolyse :
test TDA
Ajouter du perchlorure de fer (7 à 8 gouttes)
Coloration immédiate du milieu
en brun (du brun clair au brun rouge)
avec ou sans précipité
TDA+
Coloration jaune-orangé
TDA-
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
3.5.1.1. Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique théorique en g/L d’eau purifiée du milieu urée-indole est :
L-Tryptophane......................................................................................... 3
Phosphate monopotassique...................................................................
1
Phosphate bipotassique.......................................................................... 1
Chlorure de sodium .............................................................................. 5
Urée ........................................................................................................ 20
Rouge de phénol....................................................................................
0,025
Alcool à 95°........................................................................................... 0,01mL
pH 6,7
Ce milieu est disponible en tubes de 10 mL prêts à l’emploi.
Répartir le milieu urée-indole en tubes à hémolyse, vides, stériles, à raison de
1 mL par tube.
3.5.1.2. Ensemencement et incubation du milieu
Réaliser une suspension du germe à tester dans 1 mL d’eau déminéralisée stérile, puis ensemencer dans deux tubes à hémolyse de milieu urée indole une
goutte de cette suspension. 11 faut préparer obligatoirement deux tubes par souche bactérienne à étudier.
Incuber les tubes à l'étuve à 37 °C pendant 24 heures.
3.5.1.3. Lecture et interprétation du milieu
Sur le milieu urée-indole, les entérobactéries peuvent dégrader :
- l’urée si elles possèdent l’enzyme uréase (cf. supra, paragraphe 3.4.) ;
- le L-tryptophane si elles possèdent une tryptophanase (test indole, cf. supra.
paragraphe 3.3.1.) ou une tryptophane désaminase (test TDA).
Dans ce dernier cas, la désamination de cet acide aminé conduit à la production d ammoniaque et d’acide indole-3 pyruvique, qui est révélé par l'apparition
d une couleur brune en présence d’une solution de perchlorure de fer.
La lecture des trois tests (avec addition éventuelle de réactifs) et l’interprétation de ce milieu sont détaillées dans le tableau 72.
Tableau 72 ■ Lecture et interprétation du milieu urée-indole.
I-ccture directe sur les deux tubes à hémolyse après incubation
Test uréase
Milieu rouge violacé
(alcalin) après incubation
Uréase+
Milieu orange (couleur du milieu)
UréaseAddition de réactifs puis lecture
1" tube à hémolyse :
test indole
Coloration rouge en surface
(anneau rouge)
Indole+
Ajouter du réactif de Kovacs (4 à 5 gouttes)
Coloration jaune en surface
IndoleY tube a hémolyse :
test TDA
Ajouter du perchlorure de fer (7 à 8 gouttes)
Coloration immédiate du milieu
en brun (du brun clair au brun rouge)
avec ou sans précipité
TDA+
Coloration jaune-orangé
TDA-