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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
3.3. Milieux de culture pour les bactéries dégradant des acides
aminés particuliers
3.3.1. Dégradation du tryptophane
Le tryptophane peut être utilisé par certaines entérobactéries selon deux voies
métaboliques différentes :
- la première fait intervenir une tryptophane désaminase (cf. infra, paragraphe
3.5.1.);
- la seconde une tryptophanase à pyridoxal-phosphate (coenzyme), qui contrôle la dégradation du tryptophane en acide pyruvique, ammoniaque et indole.
Cette dernière substance fait virer au rouge le réactif de Kovacs (VWRTM International). Elle donne son nom au test indole qui est très utile dans la différentiation et l'identification des entérobactéries.
Le test indole peut être réalisé sur plusieurs milieux de culture dont le milieu
urée-indole (cf infra, paragraphe 3.5.1.), le milieu nutritif SIM (cf infra, paragraphe 3.5.2.) et l’eau peptonée exempte d’indole.
L'eau peptonée exempte d’indole Bio-Rad est un bouillon permettant la croissance des bactéries ne présentant pas d’exigences particulières. Il est recommandé pour la recherche de la production d’indole lors du test IMVIC (cf. supra.
paragraphe 2.4.3.) intervenant dans la recherche normalisée des coliformes
fécaux et d'Escherichia coli présumés, dans les aliments et éventuellement dans
les eaux :
- pour les aliments : normes ISO 16654 (2001) pour Escherichia coli 015'
dans les aliments, NF V 08-600 (2000) pour les coliformes fécaux et Escherichia
coli dans les coquillages vivants... ;
- pour les eaux : circulaire DGAL/SVHA/C 88/N° 8003 du 28 avril 1988 pour
le contrôle des coquillages (cf Delarras et Trébaol, 2003)...
► ( (imposition chimique et mode d’action du milieu de culture
La composition chimique (formule type) en g/L d’eau distillée de l'eau peptonée exempte d’indole Bio-Rad est :
Peptone bactériologique....................................................................... 10
Chlorure de sodium...............................................................................
5
pH final 7,2 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 15 minutes à 121 ± 1 °C
( e milieu est disponible en milieu déshydraté et en tubes de 9 mL prêts à
l'emploi.
La peptone ne doit pas contenir d’indole, mais elle doit renfermer du tryptophane pour que certaines Enterobacteriaceae manifestent leur pouvoir indologène
► Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer les tubes d eau peptonée avec les souches bactériennes à tester.
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 à 48 heures.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
3.3. Milieux de culture pour les bactéries dégradant des acides
aminés particuliers
3.3.1. Dégradation du tryptophane
Le tryptophane peut être utilisé par certaines entérobactéries selon deux voies
métaboliques différentes :
- la première fait intervenir une tryptophane désaminase (cf. infra, paragraphe
3.5.1.);
- la seconde une tryptophanase à pyridoxal-phosphate (coenzyme), qui contrôle la dégradation du tryptophane en acide pyruvique, ammoniaque et indole.
Cette dernière substance fait virer au rouge le réactif de Kovacs (VWRTM International). Elle donne son nom au test indole qui est très utile dans la différentiation et l'identification des entérobactéries.
Le test indole peut être réalisé sur plusieurs milieux de culture dont le milieu
urée-indole (cf infra, paragraphe 3.5.1.), le milieu nutritif SIM (cf infra, paragraphe 3.5.2.) et l’eau peptonée exempte d’indole.
L'eau peptonée exempte d’indole Bio-Rad est un bouillon permettant la croissance des bactéries ne présentant pas d’exigences particulières. Il est recommandé pour la recherche de la production d’indole lors du test IMVIC (cf. supra.
paragraphe 2.4.3.) intervenant dans la recherche normalisée des coliformes
fécaux et d'Escherichia coli présumés, dans les aliments et éventuellement dans
les eaux :
- pour les aliments : normes ISO 16654 (2001) pour Escherichia coli 015'
dans les aliments, NF V 08-600 (2000) pour les coliformes fécaux et Escherichia
coli dans les coquillages vivants... ;
- pour les eaux : circulaire DGAL/SVHA/C 88/N° 8003 du 28 avril 1988 pour
le contrôle des coquillages (cf Delarras et Trébaol, 2003)...
► ( (imposition chimique et mode d’action du milieu de culture
La composition chimique (formule type) en g/L d’eau distillée de l'eau peptonée exempte d’indole Bio-Rad est :
Peptone bactériologique....................................................................... 10
Chlorure de sodium...............................................................................
5
pH final 7,2 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 15 minutes à 121 ± 1 °C
( e milieu est disponible en milieu déshydraté et en tubes de 9 mL prêts à
l'emploi.
La peptone ne doit pas contenir d’indole, mais elle doit renfermer du tryptophane pour que certaines Enterobacteriaceae manifestent leur pouvoir indologène
► Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer les tubes d eau peptonée avec les souches bactériennes à tester.
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 à 48 heures.