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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
3.2.2. Par la voie des décarboxylations (décarboxylases)
La recherche des décarboxylases de l’omithine, de la lysine et de l’arginine
(cas particulier) constituent trois tests biochimiques utiles dans le diagnostic différentiel des bacilles à métabolisme fermentatif (Enterobacteriaceae, Vibrionaceae...} et des bacilles à métabolisme oxydatif (Pseudomonadaceae...).
Il s’agit respectivement des tests ODC, ADH et LDC, qui sont également présents dans la galerie API 20 E bioMérieux® sa d’identification des entérobactéries et autres bacilles à Gram- (cf. deuxième partie, chapitre 5
« Enterobacteriacae (entérobactéries) », tableaux 97A et 97B pour l’ensemble
des résultats de ces tests).
Ces trois tests peuvent être réalisés sur les bouillons « LDC-ODC-ADH » BioRad, conçus pour la recherche des décarboxylases et dihydrolase bactériennes.
Ils sont utilisés lors du contrôle microbiologique des produits alimentaires et des
eaux, en conformité avec la norme NF EN ISO 6579 (2002) pour la recherche
des Salmonella spp. et la norme NF EN ISO/DIS 19250 (2003) en qualité de
l'eau (dosage de Salmonella).
3.2.2.1. Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique (formule type) en g/L d’eau distillée du milieu de
base est :
Extrait de levure.................................................................................... 3
Chlorure de sodium*.............................................................................. 5
Glucose...................................................................................................
1
Bromocrésol pourpre (1,6 g/100 mL d’alcool à 95°)........................
1 mL
Acide aminé de forme L.......................................................................
5
pH final 6,8 ± 0,2 avec l’omithine
pH final 6,9 ± 0,2 avec l’arginine et la lysine
Le chlorure de sodium permet la croissance des bactéries halophiles ou halotolérantes telles que Vibrio parahaemolyticus, Vibrio alginolyticus...
Ce milieu est disponible en tubes de 5 mL prêts à l’emploi avec L-omithine
monochlorydrate, L-arginine monochlorydrate et L-lysine monochlorydrate.
3-22.2. Ensemencement et incubation du milieu
► Pour les bacilles Gram négatif aéroanaérobies facultatifs à métabolisme
fermentatif (Enterobacteriaceae, Vibrionaceae)
Prendre trois tubes de bouillon (coloration violette avant ensemencement1
pour l'étude de chaque souche bactérienne : un tube de bouillon LDC, un tube de
bouillon ODC et un tube de bouillon ADH.
Préparer une suspension en eau physiologique de la souche à étudier (109 bactéries par mL environ) à partir d’une culture sur gélose nutritive ou gélose trypcase soja, puis ensemencer chacun des trois tubes de bouillon avec 2 gouttes de
cette suspension.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
3.2.2. Par la voie des décarboxylations (décarboxylases)
La recherche des décarboxylases de l’omithine, de la lysine et de l’arginine
(cas particulier) constituent trois tests biochimiques utiles dans le diagnostic différentiel des bacilles à métabolisme fermentatif (Enterobacteriaceae, Vibrionaceae...} et des bacilles à métabolisme oxydatif (Pseudomonadaceae...).
Il s’agit respectivement des tests ODC, ADH et LDC, qui sont également présents dans la galerie API 20 E bioMérieux® sa d’identification des entérobactéries et autres bacilles à Gram- (cf. deuxième partie, chapitre 5
« Enterobacteriacae (entérobactéries) », tableaux 97A et 97B pour l’ensemble
des résultats de ces tests).
Ces trois tests peuvent être réalisés sur les bouillons « LDC-ODC-ADH » BioRad, conçus pour la recherche des décarboxylases et dihydrolase bactériennes.
Ils sont utilisés lors du contrôle microbiologique des produits alimentaires et des
eaux, en conformité avec la norme NF EN ISO 6579 (2002) pour la recherche
des Salmonella spp. et la norme NF EN ISO/DIS 19250 (2003) en qualité de
l'eau (dosage de Salmonella).
3.2.2.1. Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique (formule type) en g/L d’eau distillée du milieu de
base est :
Extrait de levure.................................................................................... 3
Chlorure de sodium*.............................................................................. 5
Glucose...................................................................................................
1
Bromocrésol pourpre (1,6 g/100 mL d’alcool à 95°)........................
1 mL
Acide aminé de forme L.......................................................................
5
pH final 6,8 ± 0,2 avec l’omithine
pH final 6,9 ± 0,2 avec l’arginine et la lysine
Le chlorure de sodium permet la croissance des bactéries halophiles ou halotolérantes telles que Vibrio parahaemolyticus, Vibrio alginolyticus...
Ce milieu est disponible en tubes de 5 mL prêts à l’emploi avec L-omithine
monochlorydrate, L-arginine monochlorydrate et L-lysine monochlorydrate.
3-22.2. Ensemencement et incubation du milieu
► Pour les bacilles Gram négatif aéroanaérobies facultatifs à métabolisme
fermentatif (Enterobacteriaceae, Vibrionaceae)
Prendre trois tubes de bouillon (coloration violette avant ensemencement1
pour l'étude de chaque souche bactérienne : un tube de bouillon LDC, un tube de
bouillon ODC et un tube de bouillon ADH.
Préparer une suspension en eau physiologique de la souche à étudier (109 bactéries par mL environ) à partir d’une culture sur gélose nutritive ou gélose trypcase soja, puis ensemencer chacun des trois tubes de bouillon avec 2 gouttes de
cette suspension.