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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
► Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique de ce milieu en g/L d eau distillée est :
Peptone de gélatine................................................................................ 5
Extrait de levure.................................................................................... 3
Glucose...................................................................................................
1
L-lysine .................................................................................................
Citrate ferrique ammoniacal................................................................. 0,5
Thiosulfate de sodium............................................................................ 0,04
Pourpre de bromocrésol........................................................................ 0,02
Agar....................................................................................................... 13,5
pH final 6,7 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 15 minutes à 121 °C
Ce milieu est préparé en tubes à partir du milieu déshydraté suivant les indications du fabricant. Laisser refroidir les tubes en position inclinée pour obtenir
une pente et un culot de 2 à 3 cm de haut. Il est également disponible en tubes
inclinés prêts à l'emploi.
► Ensemencement et incubation du milieu
À partir d'une colonie suspecte prélevée sur un milieu d’isolement, ensemencer le culot par piqûre centrale et la surface inclinée par stries serrées.
Incuber à 35 °C pendant 24 heures, sans revisser complètement les bouchons
des tubes.
► Lecture et interprétation du milieu
Le pourpre de bromocrésol, indicateur de pH du milieu, est violet en milieu
basique et jaune en milieu acide. La lecture du milieu se fait au niveau du culot
et de la pente :
-un culot violet indique la présence d’une lysine décarboxylase : test
LDC+ (cf. infra, paragraphe 3.2.2.3. pour l’interprétation du test). Plus précisément. le germe fermente tout d'abord le glucose du milieu en acides qui font
virer le culot au jaune ; puis, rapidement, une réalcalinisation se produit sous
1 action de la lysine décarboxylase. Le culot est jaune en l’absence de cette
enzyme ;
une pente rouge marque la présence d'une lysine désaminase : test LDA+
La lysine désaminase décompose la lysine en ammoniac et en céto-2-amino6-hexanoique. La pente est violette en l'absence de cette enzyme.
De surcroît, si le test H2S est positif, un noircissement apparaît au niveau de la
piqûre, mais seulement si le culot est alcalin, donc si le test LDC est positif.
(cf infra, paragraphe 3.3.2. pour l'interprétation du test).
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
► Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique de ce milieu en g/L d eau distillée est :
Peptone de gélatine................................................................................ 5
Extrait de levure.................................................................................... 3
Glucose...................................................................................................
1
L-lysine .................................................................................................
Citrate ferrique ammoniacal................................................................. 0,5
Thiosulfate de sodium............................................................................ 0,04
Pourpre de bromocrésol........................................................................ 0,02
Agar....................................................................................................... 13,5
pH final 6,7 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 15 minutes à 121 °C
Ce milieu est préparé en tubes à partir du milieu déshydraté suivant les indications du fabricant. Laisser refroidir les tubes en position inclinée pour obtenir
une pente et un culot de 2 à 3 cm de haut. Il est également disponible en tubes
inclinés prêts à l'emploi.
► Ensemencement et incubation du milieu
À partir d'une colonie suspecte prélevée sur un milieu d’isolement, ensemencer le culot par piqûre centrale et la surface inclinée par stries serrées.
Incuber à 35 °C pendant 24 heures, sans revisser complètement les bouchons
des tubes.
► Lecture et interprétation du milieu
Le pourpre de bromocrésol, indicateur de pH du milieu, est violet en milieu
basique et jaune en milieu acide. La lecture du milieu se fait au niveau du culot
et de la pente :
-un culot violet indique la présence d’une lysine décarboxylase : test
LDC+ (cf. infra, paragraphe 3.2.2.3. pour l’interprétation du test). Plus précisément. le germe fermente tout d'abord le glucose du milieu en acides qui font
virer le culot au jaune ; puis, rapidement, une réalcalinisation se produit sous
1 action de la lysine décarboxylase. Le culot est jaune en l’absence de cette
enzyme ;
une pente rouge marque la présence d'une lysine désaminase : test LDA+
La lysine désaminase décompose la lysine en ammoniac et en céto-2-amino6-hexanoique. La pente est violette en l'absence de cette enzyme.
De surcroît, si le test H2S est positif, un noircissement apparaît au niveau de la
piqûre, mais seulement si le culot est alcalin, donc si le test LDC est positif.
(cf infra, paragraphe 3.3.2. pour l'interprétation du test).