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Microbiologie pratique pour le laboratoire d'analyses ou de contrôle sanitaire
3.
Milieux de culture et tests biochimiques
du catabolisme des protéines
Les protéines sont des substances à poids moléculaire élevé, constituées d'acides
aminés (au nombre de 20) servant d’aliments aux bactéries. Elles ne sont pas
directement assimilables en raison de la taille de leurs molécules.
• Elles doivent tout d'abord être dégradées par les micro-organismes protéolytiques (bactéries, moisissures...) en polypeptides et acides aminés grâce à des
enzymes extracellulaires appelées protéinases ou protéases. La recherche de
l'activité de certaines de ces enzymes constitue des tests biochimiques utiles dans
l'identification bactérienne (cf infra, paragraphes 3.1. et 3.2.).
• Les polypeptides seront ensuite décomposés en acides aminés par des
peptidases, enzymes produites par de nombreux micro-organismes. Leur
recherche ne présente pas d'intérêt pratique sauf dans le cas des mycobactéries.
• Puis, ces acides aminés seront assimilés et dégradés par les micro-organismes dont les bactéries, et plus précisément par les bacilles à Gram négatif
(entérobactéries, Vibrio...). Les bactéries vont les utiliser selon deux grandes
voies métaboliques :
- la désamination des acides aminés : des désaminases (enzymes bactériennes)
assurent la libération du groupement NH, sous forme d’ammoniaque, avec la formation d'un acide ot-cétonique dans le cas des désaminations oxydatives
(cf infra, paragraphe 3.2.1.) ;
- la décarboxylation des acides aminés : des décarboxylases assurent la libération du groupement carboxyl (-COOH) sous la forme de gaz carbonique (COo
et d'une amine (cf infra, paragraphe 3.2.2.).
• Des acides aminés des deux voies précédentes ou d’autres acides aminés
peuvent être décomposés suivant des réactions métaboliques particulières. C’est
le cas avec le tryptophane (cf infra, paragraphe 3.3.1.) et avec les acides aminés
soufrés (cystine, cystéine et méthionine) (cf infra, paragraphe 3.3.2.).
3.1.
Milieux de culture pour bactéries protéolytiques
3.1.1. Gélatine nutritive
La gélatine (<;/. première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du
matériel et des milieux de culture », paragraphe 2.1.1.5.) peut être incorporée à
un milieu de culture atm de mettre en évidence sa dégradation par certaines bactciies (entérobactéries, Vibrio, Pseudomonas, Bacillus...) possédant une
gélatinase : c'est le test gélatinase.
I lusieurs méthodes lentes ou rapides ont été décrites pour réaliser ce test :
une méthode rapide, celle de Kohn-Lautrop utilise de la gélatine formolée.à
laquelle sont incorporées des particules de charbon. Les particules de charbon
sont libérées lorsque la bactérie possède la gélatinase qui hydrolyse la gélatine
c est le principe du test gélatinase, figurant dans la galerie API 20 E
Microbiologie pratique pour le laboratoire d'analyses ou de contrôle sanitaire
3.
Milieux de culture et tests biochimiques
du catabolisme des protéines
Les protéines sont des substances à poids moléculaire élevé, constituées d'acides
aminés (au nombre de 20) servant d’aliments aux bactéries. Elles ne sont pas
directement assimilables en raison de la taille de leurs molécules.
• Elles doivent tout d'abord être dégradées par les micro-organismes protéolytiques (bactéries, moisissures...) en polypeptides et acides aminés grâce à des
enzymes extracellulaires appelées protéinases ou protéases. La recherche de
l'activité de certaines de ces enzymes constitue des tests biochimiques utiles dans
l'identification bactérienne (cf infra, paragraphes 3.1. et 3.2.).
• Les polypeptides seront ensuite décomposés en acides aminés par des
peptidases, enzymes produites par de nombreux micro-organismes. Leur
recherche ne présente pas d'intérêt pratique sauf dans le cas des mycobactéries.
• Puis, ces acides aminés seront assimilés et dégradés par les micro-organismes dont les bactéries, et plus précisément par les bacilles à Gram négatif
(entérobactéries, Vibrio...). Les bactéries vont les utiliser selon deux grandes
voies métaboliques :
- la désamination des acides aminés : des désaminases (enzymes bactériennes)
assurent la libération du groupement NH, sous forme d’ammoniaque, avec la formation d'un acide ot-cétonique dans le cas des désaminations oxydatives
(cf infra, paragraphe 3.2.1.) ;
- la décarboxylation des acides aminés : des décarboxylases assurent la libération du groupement carboxyl (-COOH) sous la forme de gaz carbonique (COo
et d'une amine (cf infra, paragraphe 3.2.2.).
• Des acides aminés des deux voies précédentes ou d’autres acides aminés
peuvent être décomposés suivant des réactions métaboliques particulières. C’est
le cas avec le tryptophane (cf infra, paragraphe 3.3.1.) et avec les acides aminés
soufrés (cystine, cystéine et méthionine) (cf infra, paragraphe 3.3.2.).
3.1.
Milieux de culture pour bactéries protéolytiques
3.1.1. Gélatine nutritive
La gélatine (<;/. première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du
matériel et des milieux de culture », paragraphe 2.1.1.5.) peut être incorporée à
un milieu de culture atm de mettre en évidence sa dégradation par certaines bactciies (entérobactéries, Vibrio, Pseudomonas, Bacillus...) possédant une
gélatinase : c'est le test gélatinase.
I lusieurs méthodes lentes ou rapides ont été décrites pour réaliser ce test :
une méthode rapide, celle de Kohn-Lautrop utilise de la gélatine formolée.à
laquelle sont incorporées des particules de charbon. Les particules de charbon
sont libérées lorsque la bactérie possède la gélatinase qui hydrolyse la gélatine
c est le principe du test gélatinase, figurant dans la galerie API 20 E