Milieux de culture et tests biochimiques pour l'identification bactérienne
153
► Conseil pratique
Si la souche bactérienne à étudier provient d’un milieu d'isolement pour entérobactéries tel que la gélose EMB (cf. deuxième partie chapitre 5
« Enterobacteriaceae (entérobactéries) », paragraphe 4.2.4.) ou la gélose BCP
Bio-Rad (cf. fiche technique du fabricant), il faut réaliser une subculture sur une
gélose nutritive ordinaire.
Pour cela, prélever deux colonies caractéristiques (lactose+), en prenant soin
de ne pas entraîner de traces de milieu qui pourraient fausser le résultat du test
citrate, et les repiquer sur cette gélose. Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 heures.
2.5.3.
Lecture et interprétation du milieu
Les bactéries capables d’utiliser le citrate de sodium comme seule source de
carbone sur ce milieu produisent une alcalinisation qui fait virer le bleu de bromothymol (indicateur de pH) du vert au bleu en milieu basique ; elles sont alors
« citrate positif » : le test citrate est dit positif.
Les bactéries « citrate négatif » ne donnent ni culture ni bleuissement, même
après 7 jours d’incubation : le test citrate est alors négatif.
Les résultats du test citrate sont proposés dans le tableau 66 chez des entérobactéries couramment rencontrées et chez d’autres bactéries d'après les références indiquées en légende.
Tableau 66 ■ Observations et résultats du test citrate.
Citrate+
CitrateCitrate variable
Enterobacter aerogenes,
E. cloacae
Klebsiella subsp. pneumoniae
Klebsiella oxytoca
Escherichia coli
Hafnia alvei (utilisation
tardive
à 22-30 °C)
Salmonella enterica subsp.
arizonae (75 % + * )
Salmonella Typhi. Salmonella
Gallinarum et Salmonella
Pullorum (0 % + * )...
Salmonella enterica (exS. choleraesuis) (6 % +’)
Salmonella spp. (65 % + * )
Providencia rettgeri
Morganella morganii
Yersinia enterocolitica
Proteus mirabilis0.
P. vulgaris [-]
Vibrio cholerae (75 % + * )
Pseudomonas aeruginosa
(92 % + )
; d. 26 à 75 % des souches positives.
2 [-] : 76 à 89 % négatives (Joly et Reynaud. 2004 d’après Brenner. 1984).
:
D après tableau d’identification API 20E (bioMérieux® SA. 2004).
| 2.5.4. Contrôle de qualité du milieu
’
D'après le contrôle de qualité Bio-Rad de ce milieu, après 1 à 7 jours d incu| bation à 37 °C, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 et Salmonella Enteritidis
? ATCC 13076 sont citrate+. Les souches Proteus vulgaris ATCC 13315. Eschea richia coli ATCC 25922 et Shigella sonnei ATCC 25931 sont citrate-.
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► Conseil pratique
Si la souche bactérienne à étudier provient d’un milieu d'isolement pour entérobactéries tel que la gélose EMB (cf. deuxième partie chapitre 5
« Enterobacteriaceae (entérobactéries) », paragraphe 4.2.4.) ou la gélose BCP
Bio-Rad (cf. fiche technique du fabricant), il faut réaliser une subculture sur une
gélose nutritive ordinaire.
Pour cela, prélever deux colonies caractéristiques (lactose+), en prenant soin
de ne pas entraîner de traces de milieu qui pourraient fausser le résultat du test
citrate, et les repiquer sur cette gélose. Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 heures.
2.5.3.
Lecture et interprétation du milieu
Les bactéries capables d’utiliser le citrate de sodium comme seule source de
carbone sur ce milieu produisent une alcalinisation qui fait virer le bleu de bromothymol (indicateur de pH) du vert au bleu en milieu basique ; elles sont alors
« citrate positif » : le test citrate est dit positif.
Les bactéries « citrate négatif » ne donnent ni culture ni bleuissement, même
après 7 jours d’incubation : le test citrate est alors négatif.
Les résultats du test citrate sont proposés dans le tableau 66 chez des entérobactéries couramment rencontrées et chez d’autres bactéries d'après les références indiquées en légende.
Tableau 66 ■ Observations et résultats du test citrate.
Citrate+
CitrateCitrate variable
Enterobacter aerogenes,
E. cloacae
Klebsiella subsp. pneumoniae
Klebsiella oxytoca
Escherichia coli
Hafnia alvei (utilisation
tardive
à 22-30 °C)
Salmonella enterica subsp.
arizonae (75 % + * )
Salmonella Typhi. Salmonella
Gallinarum et Salmonella
Pullorum (0 % + * )...
Salmonella enterica (exS. choleraesuis) (6 % +’)
Salmonella spp. (65 % + * )
Providencia rettgeri
Morganella morganii
Yersinia enterocolitica
Proteus mirabilis0.
P. vulgaris [-]
Vibrio cholerae (75 % + * )
Pseudomonas aeruginosa
(92 % + )
; d. 26 à 75 % des souches positives.
2 [-] : 76 à 89 % négatives (Joly et Reynaud. 2004 d’après Brenner. 1984).
:
D après tableau d’identification API 20E (bioMérieux® SA. 2004).
| 2.5.4. Contrôle de qualité du milieu
’
D'après le contrôle de qualité Bio-Rad de ce milieu, après 1 à 7 jours d incu| bation à 37 °C, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 et Salmonella Enteritidis
? ATCC 13076 sont citrate+. Les souches Proteus vulgaris ATCC 13315. Eschea richia coli ATCC 25922 et Shigella sonnei ATCC 25931 sont citrate-.