150
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
► Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer deux tubes de bouillon MR-VP à l’anse de platine avec la souche
bactérienne à tester.
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 à 48 heures et jusqu’à 4 jours.
► Lecture et interprétation du milieu
Après incubation, réaliser à partir des deux tubes les deux tests suivants
(cf. infra, paragraphes 2.4.1. et 2.4.2).
2.4.1.
Réaction au rouge de méthyle (test RM) : fermentations acides mixtes
Après 24 à 48 heures d'incubation, prélever 1 mL de la culture en bouillon
MR-VP. le déposer dans un tube propre et réaliser la réaction au rouge de
méthyle ou test RM.
Pour cela, ajouter dans le tube 1 ou 2 gouttes d’une solution de rouge de
méthyle à 0.5 % dans l'alcool à 60° et observer.
► Lecture et interprétation du test RM
La fermentation du glucose par certaines entérobactéries produit de l’acide
pyruvique (pyruvate), puis des acides (acides lactique, succinique, acétique el
formique) et parfois des produits divers (éthanol, CO-,, H2) ; cette fermentation
est appelée fermentation acides mixtes. Des résultats du test RM sont donnés
pour des entérobactéries dans le tableau 65, d'après plusieurs sources.
Les acides font virer le rouge de méthyle (indicateur de pH) au rouge en milieu
acide : le test RM est alors positif. Dans le cas contraire, il vire au jaune : le test
RM est négatif.
Des réactions faussement positives peuvent être observées en cas de lecture
trop précoce de ce milieu.
2.4.2. Reaction de Voges-Proskauer (test VP)
Après 24 à 48 heures d'incubation, prélever 1 mL de la culture en bouillon
MR-VP. le déposer dans un tube propre et réaliser la réaction de Voges-Proskauer ou test VP. dont la technique initiale a été modifiée par Barritt.
Pour la réaliser, ajouter dans le tube 0,5 mL d'une solution à 6 % d'ot-naphtol
dans I alcool à 90° et 0,5 mL d une solution aqueuse de potasse à 40 %. Agiter
fréquemment durant 15 minutes environ et observer.
► Lecture et interprétation du test VP
La fermentation du glucose par certaines entérobactéries produit de l’acide
pyruvique, qui sera ensuite transformé en acétyl-méthyl-carbinol ( AMC) généralement appelé acétoine puis en 2.3-butanediol ; cette fermentation est dite butanediolique (anciennement fermentation 2,3-butylène-glycolique). Des résultats
du test VP sont donnés pour des entérobactéries dans le tableau 65, d’après plusieurs sources.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
► Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer deux tubes de bouillon MR-VP à l’anse de platine avec la souche
bactérienne à tester.
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 à 48 heures et jusqu’à 4 jours.
► Lecture et interprétation du milieu
Après incubation, réaliser à partir des deux tubes les deux tests suivants
(cf. infra, paragraphes 2.4.1. et 2.4.2).
2.4.1.
Réaction au rouge de méthyle (test RM) : fermentations acides mixtes
Après 24 à 48 heures d'incubation, prélever 1 mL de la culture en bouillon
MR-VP. le déposer dans un tube propre et réaliser la réaction au rouge de
méthyle ou test RM.
Pour cela, ajouter dans le tube 1 ou 2 gouttes d’une solution de rouge de
méthyle à 0.5 % dans l'alcool à 60° et observer.
► Lecture et interprétation du test RM
La fermentation du glucose par certaines entérobactéries produit de l’acide
pyruvique (pyruvate), puis des acides (acides lactique, succinique, acétique el
formique) et parfois des produits divers (éthanol, CO-,, H2) ; cette fermentation
est appelée fermentation acides mixtes. Des résultats du test RM sont donnés
pour des entérobactéries dans le tableau 65, d'après plusieurs sources.
Les acides font virer le rouge de méthyle (indicateur de pH) au rouge en milieu
acide : le test RM est alors positif. Dans le cas contraire, il vire au jaune : le test
RM est négatif.
Des réactions faussement positives peuvent être observées en cas de lecture
trop précoce de ce milieu.
2.4.2. Reaction de Voges-Proskauer (test VP)
Après 24 à 48 heures d'incubation, prélever 1 mL de la culture en bouillon
MR-VP. le déposer dans un tube propre et réaliser la réaction de Voges-Proskauer ou test VP. dont la technique initiale a été modifiée par Barritt.
Pour la réaliser, ajouter dans le tube 0,5 mL d'une solution à 6 % d'ot-naphtol
dans I alcool à 90° et 0,5 mL d une solution aqueuse de potasse à 40 %. Agiter
fréquemment durant 15 minutes environ et observer.
► Lecture et interprétation du test VP
La fermentation du glucose par certaines entérobactéries produit de l’acide
pyruvique, qui sera ensuite transformé en acétyl-méthyl-carbinol ( AMC) généralement appelé acétoine puis en 2.3-butanediol ; cette fermentation est dite butanediolique (anciennement fermentation 2,3-butylène-glycolique). Des résultats
du test VP sont donnés pour des entérobactéries dans le tableau 65, d’après plusieurs sources.