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Microbiologie pratique pour le laboratoire d analyses ou de contrôle sunitaire
► Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique de ce milieu de culture (formule type) en g/L d'eau
distillée est :
Hydrolysat trypsique de caséine.......................................................... 10
Nitrate de potassium..............................................................................
1
Mannitol.................................................................................................
7$
Rouge de phénol.................................................................................... 40 mg
Agar..........................................................................................................
3,5
pH final 7,6 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 15 minutes à 121 ± 1 °C
Ce milieu est disponible en milieu déshydraté ou en tubes de 10 mL prêts à l'emploi.
► Ensemencement et incubation du milieu
Régénérer les tubes de ce milieu au bain-marie bouillant, et laisser solidifier
en culot en position verticale dans de l’eau froide.
Ensemencer à l'anse de platine (fil droit sans boucle) les tubes par piqûre centrale dans la gélose en culot, jusque au fond du tube, avec la souche à tester.
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 18 à 24 heures.
► Lecture et interprétation du milieu
Ce milieu de culture fournit en 24 heures les résultats de trois tests :
- le test mannitol : ce polyalcool peut être fermenté ; dans ce cas, la libération
de produits acides fait virer l'indicateur de pH du rouge (en milieu basique) au
jaune (en milieu acide) ;
- le test mobilité bactérienne : un milieu faiblement gélosé (à 3,5 g/L) et un ensemencement par une piqûre verticale et centrale unique permet de réaliser ce test ;
- le test nitrate-réductases, après ajout de quelques gouttes de réactif de
Griess-Ilosvay (cf. supra, paragraphe 1.4.1.).
La lecture et 1 interprétation de ce milieu sont présentées dans le tableau 61.
Des résultats obtenus avec des entérobactéries utilisées dans le contrôle de qualité Bio-Rad de ce milieu sont proposés dans le tableau 62.
Iableau 6/ ■ Lecture et interprétation des trois tests biochimiques du milieu mannitolmobilité-nitrates.
Observations
Résultats des tests
Milieu rouge
MannitolMilieu jaune
Mannitol+
Développement le long de la piqûre
d’ensemencement et trouble du milieu
Mobilité +
Développement le long de la piqûre
d ensemencement et pas de trouble
MobilitéAjout de quelques gouttes de réactif
____________ de Griess-llosvay
Test nitrate-réductases
(cf. supra, paragraphe 1.4.1.)
Microbiologie pratique pour le laboratoire d analyses ou de contrôle sunitaire
► Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique de ce milieu de culture (formule type) en g/L d'eau
distillée est :
Hydrolysat trypsique de caséine.......................................................... 10
Nitrate de potassium..............................................................................
1
Mannitol.................................................................................................
7$
Rouge de phénol.................................................................................... 40 mg
Agar..........................................................................................................
3,5
pH final 7,6 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 15 minutes à 121 ± 1 °C
Ce milieu est disponible en milieu déshydraté ou en tubes de 10 mL prêts à l'emploi.
► Ensemencement et incubation du milieu
Régénérer les tubes de ce milieu au bain-marie bouillant, et laisser solidifier
en culot en position verticale dans de l’eau froide.
Ensemencer à l'anse de platine (fil droit sans boucle) les tubes par piqûre centrale dans la gélose en culot, jusque au fond du tube, avec la souche à tester.
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 18 à 24 heures.
► Lecture et interprétation du milieu
Ce milieu de culture fournit en 24 heures les résultats de trois tests :
- le test mannitol : ce polyalcool peut être fermenté ; dans ce cas, la libération
de produits acides fait virer l'indicateur de pH du rouge (en milieu basique) au
jaune (en milieu acide) ;
- le test mobilité bactérienne : un milieu faiblement gélosé (à 3,5 g/L) et un ensemencement par une piqûre verticale et centrale unique permet de réaliser ce test ;
- le test nitrate-réductases, après ajout de quelques gouttes de réactif de
Griess-Ilosvay (cf. supra, paragraphe 1.4.1.).
La lecture et 1 interprétation de ce milieu sont présentées dans le tableau 61.
Des résultats obtenus avec des entérobactéries utilisées dans le contrôle de qualité Bio-Rad de ce milieu sont proposés dans le tableau 62.
Iableau 6/ ■ Lecture et interprétation des trois tests biochimiques du milieu mannitolmobilité-nitrates.
Observations
Résultats des tests
Milieu rouge
MannitolMilieu jaune
Mannitol+
Développement le long de la piqûre
d’ensemencement et trouble du milieu
Mobilité +
Développement le long de la piqûre
d ensemencement et pas de trouble
MobilitéAjout de quelques gouttes de réactif
____________ de Griess-llosvay
Test nitrate-réductases
(cf. supra, paragraphe 1.4.1.)