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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
2.2.3.3. Milieu TSI ou Triple Sugar Iron Bio-Rad
Ce milieu de culture, proposé par Hajna (1945), est principalement utilisé pour
la caractérisation biochimique des entérobactéries et des Salmonella. Il permet de
mettre en évidence en 24 heures l’attaque du glucose, du lactose et/ou saccharose
ainsi que la production d'hydrogène sulfuré et de gaz.
Il est utilisé :
-lors de l'analyse des produits alimentaires, conformément aux normes ISO
6579 (2002) pour la recherche des Salmonella spp., FIL 93B (1995) pour la
recherche des Salmonella spp dans le lait et les produits laitiers, NF ISO 10272
pour la recherche des Campylobacter... ;
- dans l'analyse des eaux conformément à la norme PR EN ISO 19250 (2003)
« Qualité de l’eau - Dosage des Salmonella »... ;
11 correspond au milieu gélosé M de la Pharmacopée européenne (2004)
pour le contrôle de la contamination des produits non obligatoirement stériles
et au milieu équivalent de l’USP XXVI (2003) pour des tests microbiologiques
(cf. annexe générale 7 « Milieux de culture utilisés en Pharmacopée »).
► Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique (formule type) de ce milieu de culture en g/L d’eau
distillée est :
Extrait de viande....................................................................................
3
Extrait de levure....................................................................................
3
Peptone................................................................................................... 20
Chlorure de sodium...............................................................................
5
Lactose.................................................................................................. 10
Saccharose.............................................................................................. 10
Glucose..................................................................................................
1
Sulfate ferreux ammoniacal................................................................. 300 mg
Rouge de phénol................................................................................... 24 mg
Thiosulfate de sodium anhydre............................................................ 300 mg
Agar........................................................................................................ H
pH final 7,4 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 15 minutes à 115 ± 1 °C
( e milieu est disponible en milieu déshydraté.
Le préparer en tubes de 10 mL et le stériliser. Laisser reposer en position inclinée de façon à obtenir un culot de 2,5 cm de profondeur.
► Ensemencement et incubation du milieu
A parti! de cultures pures sur gélose nutritive, ensemencer la pente du milieu
par des stries et le culot par piqûre à l'aide d'une pipette Pasteur ou d’une anse
bouclée préalablement stérilisée à la flamme.
Incuber à 37 i 1 °C pendant 24 heures.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
2.2.3.3. Milieu TSI ou Triple Sugar Iron Bio-Rad
Ce milieu de culture, proposé par Hajna (1945), est principalement utilisé pour
la caractérisation biochimique des entérobactéries et des Salmonella. Il permet de
mettre en évidence en 24 heures l’attaque du glucose, du lactose et/ou saccharose
ainsi que la production d'hydrogène sulfuré et de gaz.
Il est utilisé :
-lors de l'analyse des produits alimentaires, conformément aux normes ISO
6579 (2002) pour la recherche des Salmonella spp., FIL 93B (1995) pour la
recherche des Salmonella spp dans le lait et les produits laitiers, NF ISO 10272
pour la recherche des Campylobacter... ;
- dans l'analyse des eaux conformément à la norme PR EN ISO 19250 (2003)
« Qualité de l’eau - Dosage des Salmonella »... ;
11 correspond au milieu gélosé M de la Pharmacopée européenne (2004)
pour le contrôle de la contamination des produits non obligatoirement stériles
et au milieu équivalent de l’USP XXVI (2003) pour des tests microbiologiques
(cf. annexe générale 7 « Milieux de culture utilisés en Pharmacopée »).
► Composition chimique du milieu de culture
La composition chimique (formule type) de ce milieu de culture en g/L d’eau
distillée est :
Extrait de viande....................................................................................
3
Extrait de levure....................................................................................
3
Peptone................................................................................................... 20
Chlorure de sodium...............................................................................
5
Lactose.................................................................................................. 10
Saccharose.............................................................................................. 10
Glucose..................................................................................................
1
Sulfate ferreux ammoniacal................................................................. 300 mg
Rouge de phénol................................................................................... 24 mg
Thiosulfate de sodium anhydre............................................................ 300 mg
Agar........................................................................................................ H
pH final 7,4 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l'autoclave : 15 minutes à 115 ± 1 °C
( e milieu est disponible en milieu déshydraté.
Le préparer en tubes de 10 mL et le stériliser. Laisser reposer en position inclinée de façon à obtenir un culot de 2,5 cm de profondeur.
► Ensemencement et incubation du milieu
A parti! de cultures pures sur gélose nutritive, ensemencer la pente du milieu
par des stries et le culot par piqûre à l'aide d'une pipette Pasteur ou d’une anse
bouclée préalablement stérilisée à la flamme.
Incuber à 37 i 1 °C pendant 24 heures.