Milieux de culture et tests biochimiques pour l'identification bactérienne
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► Test lactose et test ONPG-hydrolase
Les bactéries lactose+ possèdent la (3-galactosidase ((3-gal+) et sont toujours
ONPG+.
Les bactéries lactose- peuvent être :
- ONPG- : elles ne possèdent pas d’ONPG-hydrolase ;
- ONPG+ : elles possèdent soit une P-galactosidase, mais pas de P-galactosidase perméase et elles ne peuvent donc pas dégrader le lactose, soit une ONPGhydrolase autre qu’une (3-galactosidase.
► Technique
Prélever une anse complète d’une culture bactérienne sur un milieu lactosé
gélosé (pente du milieu de Kligler, cf. supra, paragraphe 2.2.3.1.) et faire une
suspension dense dans 0,5 mL d’eau distillée stérile. La réaction est d’autant plus
rapide qu’il y a plus de bactéries, donc plus d’enzymes.
Ajouter un disque ONPG (papier filtre stérile imprégné de tampon et
d’ONPG) commercialisé prêt à l’emploi (Bio-Rad par exemple).
Incuber au bain-marie à 37 °C pendant un temps variant entre 15 à 30 minutes
et jusqu’à 24 heures au maximum, en raison de réactions tardives positives avec
certaines bactéries.
► Lecture et interprétation
La lecture et l’interprétation du test ONPG sont présentées dans le tableau 59.
Tableau 59 ■ Résultats du test ONPG chez quelques entérobactéries.
Couleur dans
le tube
Test
ONPG
Entérobactéries1
Coloration jaune
ONPG+
Souches lactose+, P-gal+ :
E. coli, Klebsiella, Citrobacter...
Souches lactose-, P-gal- :
certaines espèces de Serratia, Enterobacter. Yersinia...
Pas de coloration
ONPGSouches lactose-, fi-gal- :
Proteus, Providencia, Salmonella saut
S. enterica subsp. arizonae et S. enterica subsp.
diarizonae ONPG+. lactose+ (par acquisition d‘un
plasmide)...
1. Des exceptions sont connues chez certaines espèces des genres cités.
► Autres bacilles à GramChez Pseudomonas aeruginosa, les souches du sérogroupe 0:11 sont, à de
rares exceptions près ONPG+, contrairement à celles des autres groupes.
Vibrio cholerae et ex-Vibrio anguillarum (Listonella anguillarum) sont
0NPG+ (mais (3-galactosidase—) alors que Vibrio parahaeniolyticus et
I • alginolyticus sont ONPG-.
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► Test lactose et test ONPG-hydrolase
Les bactéries lactose+ possèdent la (3-galactosidase ((3-gal+) et sont toujours
ONPG+.
Les bactéries lactose- peuvent être :
- ONPG- : elles ne possèdent pas d’ONPG-hydrolase ;
- ONPG+ : elles possèdent soit une P-galactosidase, mais pas de P-galactosidase perméase et elles ne peuvent donc pas dégrader le lactose, soit une ONPGhydrolase autre qu’une (3-galactosidase.
► Technique
Prélever une anse complète d’une culture bactérienne sur un milieu lactosé
gélosé (pente du milieu de Kligler, cf. supra, paragraphe 2.2.3.1.) et faire une
suspension dense dans 0,5 mL d’eau distillée stérile. La réaction est d’autant plus
rapide qu’il y a plus de bactéries, donc plus d’enzymes.
Ajouter un disque ONPG (papier filtre stérile imprégné de tampon et
d’ONPG) commercialisé prêt à l’emploi (Bio-Rad par exemple).
Incuber au bain-marie à 37 °C pendant un temps variant entre 15 à 30 minutes
et jusqu’à 24 heures au maximum, en raison de réactions tardives positives avec
certaines bactéries.
► Lecture et interprétation
La lecture et l’interprétation du test ONPG sont présentées dans le tableau 59.
Tableau 59 ■ Résultats du test ONPG chez quelques entérobactéries.
Couleur dans
le tube
Test
ONPG
Entérobactéries1
Coloration jaune
ONPG+
Souches lactose+, P-gal+ :
E. coli, Klebsiella, Citrobacter...
Souches lactose-, P-gal- :
certaines espèces de Serratia, Enterobacter. Yersinia...
Pas de coloration
ONPGSouches lactose-, fi-gal- :
Proteus, Providencia, Salmonella saut
S. enterica subsp. arizonae et S. enterica subsp.
diarizonae ONPG+. lactose+ (par acquisition d‘un
plasmide)...
1. Des exceptions sont connues chez certaines espèces des genres cités.
► Autres bacilles à GramChez Pseudomonas aeruginosa, les souches du sérogroupe 0:11 sont, à de
rares exceptions près ONPG+, contrairement à celles des autres groupes.
Vibrio cholerae et ex-Vibrio anguillarum (Listonella anguillarum) sont
0NPG+ (mais (3-galactosidase—) alors que Vibrio parahaeniolyticus et
I • alginolyticus sont ONPG-.