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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Tableau 58 ■ Résultats des tests biochimiques obtenus à 24 heures sur le milieu de Kligler
avec des entérobactéries.
Entérobactéries
Couleur
culot
Glucose
Gaz en
glucose
(culot)
Couleur
pente
Lactose
ONPG à
réaliser
h2s‘
Escherichia
coli
Jaune
Glucose+
+
Jaune
Lactose+
Non
(ONPG+)
-
Citrobacter
freundii
Jaune
Glucose+
+
Rouge
Lactose- ?d
Oui
ONPG+
+2
Proteus
mirabilis
Jaune
Glucose+
+
Rouge
Lactose- ?
(toujours
lactose
négatif)
Oui
ONPG+
1. Cf. infra, paragraphe 3.3.2.
2. 76 à 89 c.< des souches positives (Joly et Reynaud, 2003, d’après Brenner, 1984).
d. 26 à 75 c< des souches positives (Joly et Reynaud, 2003 d’après Brenner, 1984).
22.3.2. Test ONPG
Le test ONPG ou test de l'ONPG-hydrolase est complémentaire, voir indispensable, à l'étude de la dégradation du lactose chez les entérobactéries ; c’est le
cas notamment lorsque la pente du milieu de Kligler (ou Kligler-Hajna) est rouge
à 24 heures (cf. supra, tableau 57). Mais il présente également un intérêt chez
d autres bacilles à Gram- tels que les Pseudomonas, les Vibrio...
Pour que des bactéries hydrolysent le lactose, il faut qu’elles possèdent deux
enzymes :
- une (3-galactoside-perméase membranaire, permettant la pénétration du lactose dans la cellule ;
-une P-galactosidase catalysant l’hydrolyse proprement dite du lactose en
galactose et glucose.
Des études (Etienne, 2000) ont montré qu’une troisième enzyme intervient
dans I utilisation du lactose par certaines bactéries (Escherichia coli, par
exemple) : il s agit d une acétylase, dont le rôle physiologique n’est pas bien
connu.
► Principe
1. orthonitrophényl-P-D-galactopyranoside (ONPG) est un analogue structural
du lactose. C e substrat synthétique incolore peut être scindé en galactose et en
orthonitrophénol (composé soluble jaune) en présence d'une des enzymes appelées ONPG-hydrolase.
En eftet. ces enzymes correspondent :
soit à la P-galactosidase, ONPG-hydrolase qui catalyse la réaction d'hydrolyse de I ONPG ;
-son a d'autres enzymes bactériennes, désignées ONPG-hydrolases qui
ix ro \sent également I ONPG, mais pas le lactose ; elles sont différentes de la
p-galactosidase.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Tableau 58 ■ Résultats des tests biochimiques obtenus à 24 heures sur le milieu de Kligler
avec des entérobactéries.
Entérobactéries
Couleur
culot
Glucose
Gaz en
glucose
(culot)
Couleur
pente
Lactose
ONPG à
réaliser
h2s‘
Escherichia
coli
Jaune
Glucose+
+
Jaune
Lactose+
Non
(ONPG+)
-
Citrobacter
freundii
Jaune
Glucose+
+
Rouge
Lactose- ?d
Oui
ONPG+
+2
Proteus
mirabilis
Jaune
Glucose+
+
Rouge
Lactose- ?
(toujours
lactose
négatif)
Oui
ONPG+
1. Cf. infra, paragraphe 3.3.2.
2. 76 à 89 c.< des souches positives (Joly et Reynaud, 2003, d’après Brenner, 1984).
d. 26 à 75 c< des souches positives (Joly et Reynaud, 2003 d’après Brenner, 1984).
22.3.2. Test ONPG
Le test ONPG ou test de l'ONPG-hydrolase est complémentaire, voir indispensable, à l'étude de la dégradation du lactose chez les entérobactéries ; c’est le
cas notamment lorsque la pente du milieu de Kligler (ou Kligler-Hajna) est rouge
à 24 heures (cf. supra, tableau 57). Mais il présente également un intérêt chez
d autres bacilles à Gram- tels que les Pseudomonas, les Vibrio...
Pour que des bactéries hydrolysent le lactose, il faut qu’elles possèdent deux
enzymes :
- une (3-galactoside-perméase membranaire, permettant la pénétration du lactose dans la cellule ;
-une P-galactosidase catalysant l’hydrolyse proprement dite du lactose en
galactose et glucose.
Des études (Etienne, 2000) ont montré qu’une troisième enzyme intervient
dans I utilisation du lactose par certaines bactéries (Escherichia coli, par
exemple) : il s agit d une acétylase, dont le rôle physiologique n’est pas bien
connu.
► Principe
1. orthonitrophényl-P-D-galactopyranoside (ONPG) est un analogue structural
du lactose. C e substrat synthétique incolore peut être scindé en galactose et en
orthonitrophénol (composé soluble jaune) en présence d'une des enzymes appelées ONPG-hydrolase.
En eftet. ces enzymes correspondent :
soit à la P-galactosidase, ONPG-hydrolase qui catalyse la réaction d'hydrolyse de I ONPG ;
-son a d'autres enzymes bactériennes, désignées ONPG-hydrolases qui
ix ro \sent également I ONPG, mais pas le lactose ; elles sont différentes de la
p-galactosidase.