Milieux de culture et tests biochimiques pour l’identification bactérienne
141
Préparer à partir du milieu déshydraté des tubes de Kligler suivant les indications
fournies par le fabricant ou prendre des tubes commercialisés prêts à l’emploi. Le
milieu, de couleur rouge, est utilisé en tube avec une pente et un culot d’environ 3 cm.
► Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer le culot du milieu par piqûre centrale et la pente en stries serrées,
afin d’avoir une culture en nappe avec la souche bactérienne à tester. Ne pas
revisser à fond le bouchon du tube.
Incuber à 37 °C pendant 24 heures.
► Lecture et interprétation du milieu
La lecture de ce milieu se fait au niveau du culot pour le glucose et au niveau
de la pente pour le lactose. Les résultats des tests et l’interprétation sont donnés
dans le tableau 57. Des exemples de résultats de tests obtenus sur le milieu de
Kligler sont proposés dans le tableau 58.
L’interprétation du milieu de Kligler est complexe en raison des interactions
entre les métabolismes mis en jeu ; une explication classique est rappelée, sachant
que le glucose en faible concentration (1 g/L) est utilisé en premier par les entérobactéries, puis ensuite le lactose (10 g/L) présent en forte concentration. Mais il
faut aussi intégrer le mécanisme moléculaire avec le fonctionnement de l'opéron
lactose pour comprendre l’interprétation de ce milieu (Étienne, 2000).
Tableau 57 ■ Lecture et interprétation du milieu de Kligler.
Couleur
du milieu
Résultats des tests
Interprétation
Culot rouge
GlucoseGlucose non utilisé
Culot jaune
Glucose fermenté1
Avec ou sans gaz (bulles ou poche
gazeuse décollant complètement
la gélose)
• Anaérobiose relative du culot ;
attaque du glucose par voie
fermentaire dans le culot :
- acidification importante ;
- gaz éventuels (H, ou CO:)
• Attaque du glucose par voie
oxydative sur la pente (acidification faible)
Pente rouge
Lactose- ? Test ONPG-hydrolase
à réaliser
(cf. infra, paragraphe 2.2.3.2.)
Dégradation rapide des acides
aminés de la peptone libérant des
produits alcalins (NH3)... neutralisant la pente
Pente jaune
Lactose+2 => test ONPG+
(cf. infra, paragraphe 2.2.3.2.)
Oxydation et fermentation du
lactose :
acidification importante de la pente
en 24 heures, empêchant l’alcalinisation due à l'utilisation des acides
aminés de la peptone
Noir en limite
pente-culot1
Test H2S+
(cf infra, paragraphe 3.3.2.) pour
l’interprétation
I Dans le culot, l'opéron lactose est réprimé par la présence du glucose et I absence d oxygène.
-■ Après utilisation du glucose sur la pente, l’opéron lactose est induit par le lactose et la présence d oxygène.
3. Un culot entièrement noir est à considérer H2S+ et glucose+ (bioMérieux" SA).
141
Préparer à partir du milieu déshydraté des tubes de Kligler suivant les indications
fournies par le fabricant ou prendre des tubes commercialisés prêts à l’emploi. Le
milieu, de couleur rouge, est utilisé en tube avec une pente et un culot d’environ 3 cm.
► Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer le culot du milieu par piqûre centrale et la pente en stries serrées,
afin d’avoir une culture en nappe avec la souche bactérienne à tester. Ne pas
revisser à fond le bouchon du tube.
Incuber à 37 °C pendant 24 heures.
► Lecture et interprétation du milieu
La lecture de ce milieu se fait au niveau du culot pour le glucose et au niveau
de la pente pour le lactose. Les résultats des tests et l’interprétation sont donnés
dans le tableau 57. Des exemples de résultats de tests obtenus sur le milieu de
Kligler sont proposés dans le tableau 58.
L’interprétation du milieu de Kligler est complexe en raison des interactions
entre les métabolismes mis en jeu ; une explication classique est rappelée, sachant
que le glucose en faible concentration (1 g/L) est utilisé en premier par les entérobactéries, puis ensuite le lactose (10 g/L) présent en forte concentration. Mais il
faut aussi intégrer le mécanisme moléculaire avec le fonctionnement de l'opéron
lactose pour comprendre l’interprétation de ce milieu (Étienne, 2000).
Tableau 57 ■ Lecture et interprétation du milieu de Kligler.
Couleur
du milieu
Résultats des tests
Interprétation
Culot rouge
GlucoseGlucose non utilisé
Culot jaune
Glucose fermenté1
Avec ou sans gaz (bulles ou poche
gazeuse décollant complètement
la gélose)
• Anaérobiose relative du culot ;
attaque du glucose par voie
fermentaire dans le culot :
- acidification importante ;
- gaz éventuels (H, ou CO:)
• Attaque du glucose par voie
oxydative sur la pente (acidification faible)
Pente rouge
Lactose- ? Test ONPG-hydrolase
à réaliser
(cf. infra, paragraphe 2.2.3.2.)
Dégradation rapide des acides
aminés de la peptone libérant des
produits alcalins (NH3)... neutralisant la pente
Pente jaune
Lactose+2 => test ONPG+
(cf. infra, paragraphe 2.2.3.2.)
Oxydation et fermentation du
lactose :
acidification importante de la pente
en 24 heures, empêchant l’alcalinisation due à l'utilisation des acides
aminés de la peptone
Noir en limite
pente-culot1
Test H2S+
(cf infra, paragraphe 3.3.2.) pour
l’interprétation
I Dans le culot, l'opéron lactose est réprimé par la présence du glucose et I absence d oxygène.
-■ Après utilisation du glucose sur la pente, l’opéron lactose est induit par le lactose et la présence d oxygène.
3. Un culot entièrement noir est à considérer H2S+ et glucose+ (bioMérieux" SA).