Milieux de culture et tests biochimiques pour l'identification bactérienne
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2.2.1.4. Contrôle de qualité du milieu
Cf. supra, tableau 56.
2.2.2. Bouillons lactoses
Il s’agit de milieux de culture en tubes, sélectifs ou non, contenant du lactose,
un indicateur de pH et/ou une cloche de Durham :
- le bouillon lactosé au pourpre de bromocrésol avec cloche de Durham ou
bouillon BCP Lactose Bio-Rad, non sélectif, pour la recherche présomptive des
coliformes (totaux) et des coliformes thermotolérants en microbiologie des eaux
(Delarras et Trébaol, 2003) ;
- le bouillon lactosé avec cloche de Durham bioMérieux " sa, non sélectif, pour
la recherche des entérobactéries (dont les coliformes) ou autres bacilles à Gramselon les applications (eaux, aliments, produits non stériles...) (cf. deuxième partie,
chapitre 5 « Enterobactericeae » (entérobactéries), paragraphe 4.1.1.);
- le bouillon au sulfate de lauryle avec cloche de Durham VWR™ International (Merck) pour la recherche présomptive des Escherichia coli dans l'eau, les
produits laitiers, les denrées alimentaires et dans les coquillages marins (Delarras
et Trébaol, 2003).
Un autre exemple est proposé avec le bouillon de Mac Conkey bioMérieux ' SA.
Ce milieu sélectif, conforme au milieu liquide G de la Pharmacopée européenne 4, a été conçu pour la recherche des Escherichia coli dans les produits
pharmaceutiques non obligatoirement stériles (cf. annexe générale 7 « Milieux de
culture utilisés en Pharmacopée »).
► Composition chimique du milieu de culture
La formule théorique de ce milieu de culture en g/L d’eau purifiée est :
Hydrolysat pancréatique de gélatine (bovin)*..................................... 20
Lactose monohydraté (bovin).............................................................. 10
Bile déshydratée**..................................................................................
5
Pourpre de bromocrésol.......................................................................
0,01
pH 7,3
autre origine possible (porcin)
autre origine possible (ovin)
|
Ce milieu est disponible en flacons (100 mL) prêts à l'emploi.
| ► Ensemencement et incubation du milieu
En contrôle pharmaceutique, introduire stérilement I mL de bouillon trypcase
• soja ensemencé dans un flacon contenant 100 mL de bouillon Mac Conkey.
Incuber de 43 à 45 °C pendant 20 à 28 heures.
3
À partir du flacon de bouillon de Mac Conkey, isoler les Escherichia coli en
। poursuivant par un ensemencement en stries sur un milieu sélectif solide (en
I boîte de Pétri) tel que la gélose Mac Conkey (cf. deuxième partie, chapitre 5
« Enterobacteriaceae (entérobactéries) », paragraphe 4.2.2.).
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2.2.1.4. Contrôle de qualité du milieu
Cf. supra, tableau 56.
2.2.2. Bouillons lactoses
Il s’agit de milieux de culture en tubes, sélectifs ou non, contenant du lactose,
un indicateur de pH et/ou une cloche de Durham :
- le bouillon lactosé au pourpre de bromocrésol avec cloche de Durham ou
bouillon BCP Lactose Bio-Rad, non sélectif, pour la recherche présomptive des
coliformes (totaux) et des coliformes thermotolérants en microbiologie des eaux
(Delarras et Trébaol, 2003) ;
- le bouillon lactosé avec cloche de Durham bioMérieux " sa, non sélectif, pour
la recherche des entérobactéries (dont les coliformes) ou autres bacilles à Gramselon les applications (eaux, aliments, produits non stériles...) (cf. deuxième partie,
chapitre 5 « Enterobactericeae » (entérobactéries), paragraphe 4.1.1.);
- le bouillon au sulfate de lauryle avec cloche de Durham VWR™ International (Merck) pour la recherche présomptive des Escherichia coli dans l'eau, les
produits laitiers, les denrées alimentaires et dans les coquillages marins (Delarras
et Trébaol, 2003).
Un autre exemple est proposé avec le bouillon de Mac Conkey bioMérieux ' SA.
Ce milieu sélectif, conforme au milieu liquide G de la Pharmacopée européenne 4, a été conçu pour la recherche des Escherichia coli dans les produits
pharmaceutiques non obligatoirement stériles (cf. annexe générale 7 « Milieux de
culture utilisés en Pharmacopée »).
► Composition chimique du milieu de culture
La formule théorique de ce milieu de culture en g/L d’eau purifiée est :
Hydrolysat pancréatique de gélatine (bovin)*..................................... 20
Lactose monohydraté (bovin).............................................................. 10
Bile déshydratée**..................................................................................
5
Pourpre de bromocrésol.......................................................................
0,01
pH 7,3
autre origine possible (porcin)
autre origine possible (ovin)
|
Ce milieu est disponible en flacons (100 mL) prêts à l'emploi.
| ► Ensemencement et incubation du milieu
En contrôle pharmaceutique, introduire stérilement I mL de bouillon trypcase
• soja ensemencé dans un flacon contenant 100 mL de bouillon Mac Conkey.
Incuber de 43 à 45 °C pendant 20 à 28 heures.
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À partir du flacon de bouillon de Mac Conkey, isoler les Escherichia coli en
। poursuivant par un ensemencement en stries sur un milieu sélectif solide (en
I boîte de Pétri) tel que la gélose Mac Conkey (cf. deuxième partie, chapitre 5
« Enterobacteriaceae (entérobactéries) », paragraphe 4.2.2.).