Milieux de culture et tests biochimiques pour l’identification bactérienne
137
Tableau 55 ■ Lecture et interprétation du milieu MEVAG Staphylococcus.
Observation du milieu
de culture en tube
Test glucose
Bactéries
Culture dans la partie
supérieure du milieu
uniquement
Aérobiose en surface (zone aérobie de 0,5 cm
environ de hauteur)
Virage au jaune du milieu
en surface
Glucose oxydé+
Kocuria varions,
K. kristinae, K. rosea
Pas de virage du milieu
au jaune en surface
Glucose non oxydéMicrococcus luteus,
Kytococcus sedentarius...
Culture sur toute
la hauteur du milieu
Aérobiose en surface et anaérobiose en profondeur
Virage au jaune du milieu
sur toute la hauteur
Glucose oxydé et fermenté
Staphylococcus dont
S. aureus
2.1.2.4. Contrôle de qualité du milieu
Après 18 à 24 heures d’incubation à 37 °C, la souche Staphylococcus aureus
ATTCC 25923 se développe et produit un virage au jaune en aérobiose et en
anaérobiose alors que la souche Micrococcus luteus ATCC 9341 se développe
avec un virage au jaune en aérobiose uniquement (exception).
2.2.
Milieux glucidiques pour bactéries fermentatives
Des milieux de culture contenant un ou plusieurs glucides pennettent d'étudier l'utilisation des sucres par les bactéries fermentatives (entérobactéries, Staphylococcus...).
2.2.1. Bouillon au rouge de phénol (VWR™ International, Merck)
Ce milieu de culture, additionné d’un glucide, avec cloche de Durham est utilisé pour réaliser des tests de fermentation des glucides, utiles dans l'identification biochimique de bactéries.
2.2.1.1. Composition chimique du milieu de culture
La composition type de ce milieu de culture en g/L d'eau distillée est la suivante :
La
photocopie non
autorisée est un
délit
Peptone de caséine................................................................................
5
Peptone de viande..................................................................................
5
Chlorure de sodium................................................................................
5
Rouge de phénol....................................................................................
0,018
pH 7,4 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l’autoclave : 15 minutes à 121 °C
Préparer le milieu, le répartir en tubes et le stériliser puis incorporer dans ces tubes
une solution stérile du glucide à étudier à une concentration finale de 5 à 10 g/L.
Le bouillon ainsi préparé est limpide et rouge. De nombreux glucides peuvent
g être testés pour l’identification biochimique de bactéries : D(+)-G a lactose, D(-)o Mannitol, D(+)-Mannose, L(+)-Rhamnose, Tréhalose, D(+)-Xylose...
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Tableau 55 ■ Lecture et interprétation du milieu MEVAG Staphylococcus.
Observation du milieu
de culture en tube
Test glucose
Bactéries
Culture dans la partie
supérieure du milieu
uniquement
Aérobiose en surface (zone aérobie de 0,5 cm
environ de hauteur)
Virage au jaune du milieu
en surface
Glucose oxydé+
Kocuria varions,
K. kristinae, K. rosea
Pas de virage du milieu
au jaune en surface
Glucose non oxydéMicrococcus luteus,
Kytococcus sedentarius...
Culture sur toute
la hauteur du milieu
Aérobiose en surface et anaérobiose en profondeur
Virage au jaune du milieu
sur toute la hauteur
Glucose oxydé et fermenté
Staphylococcus dont
S. aureus
2.1.2.4. Contrôle de qualité du milieu
Après 18 à 24 heures d’incubation à 37 °C, la souche Staphylococcus aureus
ATTCC 25923 se développe et produit un virage au jaune en aérobiose et en
anaérobiose alors que la souche Micrococcus luteus ATCC 9341 se développe
avec un virage au jaune en aérobiose uniquement (exception).
2.2.
Milieux glucidiques pour bactéries fermentatives
Des milieux de culture contenant un ou plusieurs glucides pennettent d'étudier l'utilisation des sucres par les bactéries fermentatives (entérobactéries, Staphylococcus...).
2.2.1. Bouillon au rouge de phénol (VWR™ International, Merck)
Ce milieu de culture, additionné d’un glucide, avec cloche de Durham est utilisé pour réaliser des tests de fermentation des glucides, utiles dans l'identification biochimique de bactéries.
2.2.1.1. Composition chimique du milieu de culture
La composition type de ce milieu de culture en g/L d'eau distillée est la suivante :
La
photocopie non
autorisée est un
délit
Peptone de caséine................................................................................
5
Peptone de viande..................................................................................
5
Chlorure de sodium................................................................................
5
Rouge de phénol....................................................................................
0,018
pH 7,4 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l’autoclave : 15 minutes à 121 °C
Préparer le milieu, le répartir en tubes et le stériliser puis incorporer dans ces tubes
une solution stérile du glucide à étudier à une concentration finale de 5 à 10 g/L.
Le bouillon ainsi préparé est limpide et rouge. De nombreux glucides peuvent
g être testés pour l’identification biochimique de bactéries : D(+)-G a lactose, D(-)o Mannitol, D(+)-Mannose, L(+)-Rhamnose, Tréhalose, D(+)-Xylose...