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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Des milieux de culture permettent de déterminer facilement cette voie d’attaque des glucides (glucose en particulier) par les bactéries.
2.I. /. Milieu de Hugh et Leifson
Le milieu OF, milieu de base pour la détermination de l’oxydation et de la
fermentation selon Hugh et Leifson (VWR™ International, Merck), couramment
dénommé milieu de Hugh et Leifson, a été mis au point par ces deux microbiologistes en 1953 pour étudier le métabolisme oxydatif et fermentatif des microorganismes durant la dégradation des glucides.
Il est le plus souvent additionné de glucose pour la détermination de la voie
d'attaque de cet ose par des bacilles à Gram- (entérobactéries, Pseudomonas,
Vibrio, Campylobacter...). Mais il peut aussi être préparé avec d’autres glucides
(lactose, saccharose...) pour étudier le métabolisme glucidique des bactéries précitées ou d’autres bactéries.
2.1.1.1. Composition chimique du milieu de culture
Sa composition type en g/L d’eau distillée est la suivante :
Peptone de caséine................................................................................ 2
Extrait de levure....................................................................................
1
Chlorure de sodium................................................................................ 5
Phosphate dipotassique.........................................................................
0,2
Bleu de bromothymol...........................................................................
0,08
Agar-agar................................................................................................
2,5
Glucide à ajouter* (ici, glucose)........................................................... 10
pH 7,1 ±0,1 à 25 °C
Stérilisation à l’autoclave : 15 minutes à 121 °C
* glucide à préparer et à ajouter après stérilisation du milieu suivant les indications du fabricant.
2.1.1.2. Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer deux tubes en piqûre profonde (fil de platine droit) jusqu au fond
du tube avec une culture pure et jeune du germe à étudier. Recouvrir l’un de>
deux tubes d une couche d'huile de paraffine stérile (1 cm d’épaisseur).
Incuber en général à 37 C pendant 48 heures ou plus.
2.1.13. Lecture et interprétation du milieu
Le bleu de bromothymol, indicateur de pH de ce milieu permet d’apprécier la
dégradation du glucide (glucose) qui libère des acides et éventuellement des gaz.
I indicateur de pH vire alors au jaune en milieu acide, sinon il conserve la couleur
verte du milieu (pH 7.1) ou il vire au bleu en cas d’alcalinisation (cf. tableau53).
’s résultats obtenus sur ce milieu avec des bactéries rencontrées en routine son!
données dans le tableau 54, d’après la fiche technique du fabricant.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Des milieux de culture permettent de déterminer facilement cette voie d’attaque des glucides (glucose en particulier) par les bactéries.
2.I. /. Milieu de Hugh et Leifson
Le milieu OF, milieu de base pour la détermination de l’oxydation et de la
fermentation selon Hugh et Leifson (VWR™ International, Merck), couramment
dénommé milieu de Hugh et Leifson, a été mis au point par ces deux microbiologistes en 1953 pour étudier le métabolisme oxydatif et fermentatif des microorganismes durant la dégradation des glucides.
Il est le plus souvent additionné de glucose pour la détermination de la voie
d'attaque de cet ose par des bacilles à Gram- (entérobactéries, Pseudomonas,
Vibrio, Campylobacter...). Mais il peut aussi être préparé avec d’autres glucides
(lactose, saccharose...) pour étudier le métabolisme glucidique des bactéries précitées ou d’autres bactéries.
2.1.1.1. Composition chimique du milieu de culture
Sa composition type en g/L d’eau distillée est la suivante :
Peptone de caséine................................................................................ 2
Extrait de levure....................................................................................
1
Chlorure de sodium................................................................................ 5
Phosphate dipotassique.........................................................................
0,2
Bleu de bromothymol...........................................................................
0,08
Agar-agar................................................................................................
2,5
Glucide à ajouter* (ici, glucose)........................................................... 10
pH 7,1 ±0,1 à 25 °C
Stérilisation à l’autoclave : 15 minutes à 121 °C
* glucide à préparer et à ajouter après stérilisation du milieu suivant les indications du fabricant.
2.1.1.2. Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer deux tubes en piqûre profonde (fil de platine droit) jusqu au fond
du tube avec une culture pure et jeune du germe à étudier. Recouvrir l’un de>
deux tubes d une couche d'huile de paraffine stérile (1 cm d’épaisseur).
Incuber en général à 37 C pendant 48 heures ou plus.
2.1.13. Lecture et interprétation du milieu
Le bleu de bromothymol, indicateur de pH de ce milieu permet d’apprécier la
dégradation du glucide (glucose) qui libère des acides et éventuellement des gaz.
I indicateur de pH vire alors au jaune en milieu acide, sinon il conserve la couleur
verte du milieu (pH 7.1) ou il vire au bleu en cas d’alcalinisation (cf. tableau53).
’s résultats obtenus sur ce milieu avec des bactéries rencontrées en routine son!
données dans le tableau 54, d’après la fiche technique du fabricant.