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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Ensemencer dans la masse un tube de gélose gélatine de Legroux comme la
gélose viande-foie avec une souche de Pseudomonas aeruginosa cultivée en
bouillon trypcase soja ; refroidir rapidement le tube.
Incuber à 37 °C pendant 24 à 48 heures.
Observer le développement de cette bactérie sur toute la hauteur du tube de
gélose gélatine de Legroux.
1.5.
Mesure de l’activité de la réductase microbienne - Application
Le développement de la plupart des bactéries s’accompagne d’un abaissement
du potentiel d'oxydoréduction du milieu de culture. Cette modification peut être
mise en évidence par le bleu de méthylène qui, bleu à l’état oxydé, peut virer à
l'incolore (leucodérivé) à l’état réduit en présence de la réductase microbienne.
1.5.1. Technique générale de recherche
Préparer en tubes de culture stériles les mélanges de bouillon trypcase soja
stérile et d'une culture d'Escherichia coli de 24 heures (en bouillon trypcase
soja), suivant les indications données dans le tableau 52.
Puis, ajouter à chaque tube 1 mL d’une solution aqueuse de bleu de méthylène
au 1/5000 et homogénéiser les tubes.
Tableau 52 ■ Préparation de dilutions d'une culture d'Escherichia coli.
Tube n°
Bouillon trypcase soja
en mL
Culture d'Escherichia
coli en mL
Volume total
en mL
Témoin
9
0
9
1
8
1
9
2
7
2
9
3
6
3
9
4
5
4
9
5
4
5
9
Incuber cette série de tubes dans l'étuve à 37 °C.
( )bserver les tubes toutes les 10 minutes jusqu’à ce que la décoloration du bleu
de méthylène soit complète (sauf dans le tube témoin et dans la partie supérieure
du milieu des tubes 1 à 5).
Le bleu de méthylène capte et fixe les molécules d'hydrogène transportées par
la chaîne respiratoire bactérienne en présence de la réductase bactérienne ; il vire
alors du bleu à 1 incolore. La décoloration du bleu de méthylène est d’autant plus
rapide que le nombre de bactéries est élevé ; elle débute donc dans le tube 5, puis
elle peut être observée dans les tubes 4,3,2 et 1. En surface, le bleu de méthylène
conserve sa couleur bleue, car l'oxygène de l'air fixe les molécules d'hydrogène
provenant de la chaîne respiratoire.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Ensemencer dans la masse un tube de gélose gélatine de Legroux comme la
gélose viande-foie avec une souche de Pseudomonas aeruginosa cultivée en
bouillon trypcase soja ; refroidir rapidement le tube.
Incuber à 37 °C pendant 24 à 48 heures.
Observer le développement de cette bactérie sur toute la hauteur du tube de
gélose gélatine de Legroux.
1.5.
Mesure de l’activité de la réductase microbienne - Application
Le développement de la plupart des bactéries s’accompagne d’un abaissement
du potentiel d'oxydoréduction du milieu de culture. Cette modification peut être
mise en évidence par le bleu de méthylène qui, bleu à l’état oxydé, peut virer à
l'incolore (leucodérivé) à l’état réduit en présence de la réductase microbienne.
1.5.1. Technique générale de recherche
Préparer en tubes de culture stériles les mélanges de bouillon trypcase soja
stérile et d'une culture d'Escherichia coli de 24 heures (en bouillon trypcase
soja), suivant les indications données dans le tableau 52.
Puis, ajouter à chaque tube 1 mL d’une solution aqueuse de bleu de méthylène
au 1/5000 et homogénéiser les tubes.
Tableau 52 ■ Préparation de dilutions d'une culture d'Escherichia coli.
Tube n°
Bouillon trypcase soja
en mL
Culture d'Escherichia
coli en mL
Volume total
en mL
Témoin
9
0
9
1
8
1
9
2
7
2
9
3
6
3
9
4
5
4
9
5
4
5
9
Incuber cette série de tubes dans l'étuve à 37 °C.
( )bserver les tubes toutes les 10 minutes jusqu’à ce que la décoloration du bleu
de méthylène soit complète (sauf dans le tube témoin et dans la partie supérieure
du milieu des tubes 1 à 5).
Le bleu de méthylène capte et fixe les molécules d'hydrogène transportées par
la chaîne respiratoire bactérienne en présence de la réductase bactérienne ; il vire
alors du bleu à 1 incolore. La décoloration du bleu de méthylène est d’autant plus
rapide que le nombre de bactéries est élevé ; elle débute donc dans le tube 5, puis
elle peut être observée dans les tubes 4,3,2 et 1. En surface, le bleu de méthylène
conserve sa couleur bleue, car l'oxygène de l'air fixe les molécules d'hydrogène
provenant de la chaîne respiratoire.