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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
► Conseil pratique
11 ne faut pas utiliser l'anse de platine (fil nickel-chrome) qui peut oxyder le
réactif contenu dans le disque et donner de faux positifs.
1.4.
Recherche des nitrate-réductases (NR)
Certaines bactéries (entérobactéries, Pseudomonas...) ont la capacité de
réduire les nitrates. Elles peuvent soit seulement assimiler les nitrates soit les
assimiler et les respirer suivant deux types de réactions :
- une réaction assimilatrice sous la dépendance d’une nitratase de type B
(NRB) ou nitrate réductase assimilatrice ;
- une respiration nitrates s'effectuant en anaérobiose sous la dépendance d'une
nitrate-réductase de type A (NRA) ou nitrate réductase dissimilatrice.
Dans la pratique courante, le type de nitrate-réductase n’est pas déterminé ; on
met en évidence la réduction des nitrates en recherchant les nitrites formés en
utilisant le réactif de Griess-Ilosvay : c’est le test nitrate-réductases.
Elle est complétée par l’épreuve de Zo-Bell (ajout de poudre de zinc) pour
certaines bactéries, qui réduisent les nitrates au-delà du « stade nitrites ».
1.4.1. Test nitrate-réductases
11 est réalisé sur le milieu mannitol-mobilité-nitrate Bio-Rad (cf. infra, paragraphe 2.2.4.1.) ou dans une gélose au nitrate conventionnelle dont la composition chimique en g/L d’eau distillée est :
Extrait de viande....................................................................................
3
Peptone...................................................................................................
5
KNO; ............................................................................................
1
Agar......................................................................................................... 12
pH final 7,2 ± 0,2
Stérilisation à l’autoclave : 15 minutes à 121 °C
Ensemencer les tubes de gélose au nitrate (culot et pente), par piqûre dans le
culot et stries sur la pente, avec les souches bactériennes à étudier.
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 18 à 24 heures. Certaines bactéries réduisant les
nitrates lentement, il est parfois nécessaire d’ensemencer un deuxième tube pour
une lecture après 48 heures d’incubation.
Rechercher les nitrites en introduisant dans les tubes quelques gouttes de réactif de Griess-Ilosvay \ WR International, par exemple (Merck : acide sulfanili *
que. 1-naphtylamine, acide acétique). La lecture et l’interprétation sont
présentées dans le tableau 51.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
► Conseil pratique
11 ne faut pas utiliser l'anse de platine (fil nickel-chrome) qui peut oxyder le
réactif contenu dans le disque et donner de faux positifs.
1.4.
Recherche des nitrate-réductases (NR)
Certaines bactéries (entérobactéries, Pseudomonas...) ont la capacité de
réduire les nitrates. Elles peuvent soit seulement assimiler les nitrates soit les
assimiler et les respirer suivant deux types de réactions :
- une réaction assimilatrice sous la dépendance d’une nitratase de type B
(NRB) ou nitrate réductase assimilatrice ;
- une respiration nitrates s'effectuant en anaérobiose sous la dépendance d'une
nitrate-réductase de type A (NRA) ou nitrate réductase dissimilatrice.
Dans la pratique courante, le type de nitrate-réductase n’est pas déterminé ; on
met en évidence la réduction des nitrates en recherchant les nitrites formés en
utilisant le réactif de Griess-Ilosvay : c’est le test nitrate-réductases.
Elle est complétée par l’épreuve de Zo-Bell (ajout de poudre de zinc) pour
certaines bactéries, qui réduisent les nitrates au-delà du « stade nitrites ».
1.4.1. Test nitrate-réductases
11 est réalisé sur le milieu mannitol-mobilité-nitrate Bio-Rad (cf. infra, paragraphe 2.2.4.1.) ou dans une gélose au nitrate conventionnelle dont la composition chimique en g/L d’eau distillée est :
Extrait de viande....................................................................................
3
Peptone...................................................................................................
5
KNO; ............................................................................................
1
Agar......................................................................................................... 12
pH final 7,2 ± 0,2
Stérilisation à l’autoclave : 15 minutes à 121 °C
Ensemencer les tubes de gélose au nitrate (culot et pente), par piqûre dans le
culot et stries sur la pente, avec les souches bactériennes à étudier.
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 18 à 24 heures. Certaines bactéries réduisant les
nitrates lentement, il est parfois nécessaire d’ensemencer un deuxième tube pour
une lecture après 48 heures d’incubation.
Rechercher les nitrites en introduisant dans les tubes quelques gouttes de réactif de Griess-Ilosvay \ WR International, par exemple (Merck : acide sulfanili *
que. 1-naphtylamine, acide acétique). La lecture et l’interprétation sont
présentées dans le tableau 51.