Milieux de culture et tests biochimiques pour l’identification bactérienne
127
1.1.2.1. Composition chimique du milieu de culture
Ce milieu semi-solide, gélosé à 6%o, a la composition chimique (formule
type) en g/L d’eau distillée suivante :
Base viande-foie.................................................................................... 30
Glucose.................................................................................................... 2
Agar........................................................................................................
6
pH final 7,6 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l’autoclave : 20 minutes à 121 ± 1 °C
Le milieu peut être préparé à partir du milieu déshydraté, coulé en tubes étroits
(à raison de 7 à 8 mL par tube) puis stérilisé à l’autoclave. Il est également disponible en tubes prêts à l’emploi (7,5 mL par tube).
1.1.2.2. Ensemencement et incubation du milieu
Liquéfier les milieux au bain-marie bouillant et les régénérer pendant
20 minutes. Les refroidir dans un bain-marie réglé entre 44 et 47 °C.
Ensemencer « dans la masse » les géloses viande-foie avec les souches bactériennes à étudier. Pour cela :
- plonger l’effilure d’une pipette Pasteur fermée et stérilisée par flambage
dans la culture mère de la souche bactérienne à étudier ;
- égoutter l’effilure, puis transporter l’inoculum dans le fond du tube ; remonter et redescendre la pipette en exécutant un mouvement de vrille à plusieurs
reprises ;
- enfin, refroidir rapidement le tube de milieu sous l’eau froide en position
verticale pour réduire l’action nocive de la chaleur sur les bactéries.
Incuber à 37 °C pendant 24 à 48 heures (jusqu’à 7 jours éventuellement).
Observer les tubes et déterminer les types respiratoires des bactéries étudiées.
1.1.2.3. Lecture et interprétation du milieu
Les bactéries aérobies strictes se développent uniquement dans la zone super. ficielle.
§
5
Les bactéries aéroanaérobies ou anaérobies facultatives se développent sur
J toute la hauteur du milieu alors que les bactéries anaérobies strictes se dévelop। pent uniquement en profondeur.
§
Les bactéries microaérophi les forment un anneau dans la zone intermédiaire
î
aérobiose-anaérobiose.
5
Après 24 à 48 heures d'incubation, Bacillus sutilis ATCC 6633 a une croisI sance aérobie, Escherichia coli ATTCC 25922 une croissance aéroanaérobie et
Clostridium perfringens ATCC 13124 une croissance anaérobie.
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1.1.2.1. Composition chimique du milieu de culture
Ce milieu semi-solide, gélosé à 6%o, a la composition chimique (formule
type) en g/L d’eau distillée suivante :
Base viande-foie.................................................................................... 30
Glucose.................................................................................................... 2
Agar........................................................................................................
6
pH final 7,6 ± 0,2 à 25 °C
Stérilisation à l’autoclave : 20 minutes à 121 ± 1 °C
Le milieu peut être préparé à partir du milieu déshydraté, coulé en tubes étroits
(à raison de 7 à 8 mL par tube) puis stérilisé à l’autoclave. Il est également disponible en tubes prêts à l’emploi (7,5 mL par tube).
1.1.2.2. Ensemencement et incubation du milieu
Liquéfier les milieux au bain-marie bouillant et les régénérer pendant
20 minutes. Les refroidir dans un bain-marie réglé entre 44 et 47 °C.
Ensemencer « dans la masse » les géloses viande-foie avec les souches bactériennes à étudier. Pour cela :
- plonger l’effilure d’une pipette Pasteur fermée et stérilisée par flambage
dans la culture mère de la souche bactérienne à étudier ;
- égoutter l’effilure, puis transporter l’inoculum dans le fond du tube ; remonter et redescendre la pipette en exécutant un mouvement de vrille à plusieurs
reprises ;
- enfin, refroidir rapidement le tube de milieu sous l’eau froide en position
verticale pour réduire l’action nocive de la chaleur sur les bactéries.
Incuber à 37 °C pendant 24 à 48 heures (jusqu’à 7 jours éventuellement).
Observer les tubes et déterminer les types respiratoires des bactéries étudiées.
1.1.2.3. Lecture et interprétation du milieu
Les bactéries aérobies strictes se développent uniquement dans la zone super. ficielle.
§
5
Les bactéries aéroanaérobies ou anaérobies facultatives se développent sur
J toute la hauteur du milieu alors que les bactéries anaérobies strictes se dévelop। pent uniquement en profondeur.
§
Les bactéries microaérophi les forment un anneau dans la zone intermédiaire
î
aérobiose-anaérobiose.
5
Après 24 à 48 heures d'incubation, Bacillus sutilis ATCC 6633 a une croisI sance aérobie, Escherichia coli ATTCC 25922 une croissance aéroanaérobie et
Clostridium perfringens ATCC 13124 une croissance anaérobie.