Méthodes de travail en microbiologie
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Tableau 43 ■ Positions de la spore bactérienne dans les sporanges et quelques exemples.
Genres bactériens
Spore centrale ou subterminale
Spore terminale
Bacillus'
Famille des Bacillaceae :
B. cereus, B. megaterium,
B. subtilis subsp. subtilis... à
spores ellipsoïdales non déformantes
Famille des Bacillaceae : Bacillus
stearothermophilus2 (Bacillus
thermophile)... à spores ovales
détonnantes
Clostridium'
Famille des Clostridiaceae :
Cl. perfringens, Cl. sporogenes,
Cl. fallas... à spores ovales ou
sphériques déformantes
Famille des Clostridiaceae : Clostridium tetani à spore sphérique ou
ovale déformante
1. Cf. annexe générale 3 « Classification phylogénique des bactéries ».
2. Devient Geobacillus stearothermophilus.
Ces spores bactériennes peuvent être observées :
- à l’état frais, sans coloration : des spores libres ou encore dans leurs sporanges sont visibles grâce à leur réfringence à la lumière ;
- sur une coloration de Gram : les bactéries capables de sporuler sont Gram+,
mais elles deviennent en vieillissant Gram- Les cellules végétatives sont donc
colorées en violet ainsi que les sporanges, les spores rosées ou non colorées. Les
spores libres apparaissent avec un contour rose violacé et un intérieur rose pâle ;
en effet, les colorants de la coloration de Gram ne peuvent pas pénétrer dans les
spores, protégées par leurs enveloppes ;
- sur une coloration spécifique à chaud : parfois réalisée en routine, cette coloration facilite le repérage des spores lorsqu’elles sont rares dans un produit. Elle
permet aussi de préciser la forme de la spore et sa position dans le sporange.
► Coloration classique des spores bactériennes
Réaliser un frottis de la culture bactérienne à étudier, puis :
-le recouvrir d’une solution aqueuse de vert malachite à 0,5 % (cf. infra,
tableau 44). Chauffer pendant quelques minutes, sur une platine chauffante,
jusqu’à émission de vapeurs. Rajouter du colorant pendant le chauffage si nécessaire, sans jamais laisser évaporer complètement le colorant ;
- laver à l’eau distillée ;
|
- colorer avec de la safranine (cf infra, tableau 44) pendant 30 secondes.
Les cellules végétatives apparaissent colorées en rouge, les spores en vert dans
* leurs sporanges rouges et les spores libres colorées en vert.
g
Tableau 44 ■ Composition chimique des colorants de la coloration des spores
Vert malachite
Vert malachite
............................... ..................... 0.5 g
Eau distillée .............................................................................................. ..................... 100 mL
Safranine
Safranine
................................... ..................... 0.5 g
Eau distillée .............................................................................................. ..................... 100 mL
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Tableau 43 ■ Positions de la spore bactérienne dans les sporanges et quelques exemples.
Genres bactériens
Spore centrale ou subterminale
Spore terminale
Bacillus'
Famille des Bacillaceae :
B. cereus, B. megaterium,
B. subtilis subsp. subtilis... à
spores ellipsoïdales non déformantes
Famille des Bacillaceae : Bacillus
stearothermophilus2 (Bacillus
thermophile)... à spores ovales
détonnantes
Clostridium'
Famille des Clostridiaceae :
Cl. perfringens, Cl. sporogenes,
Cl. fallas... à spores ovales ou
sphériques déformantes
Famille des Clostridiaceae : Clostridium tetani à spore sphérique ou
ovale déformante
1. Cf. annexe générale 3 « Classification phylogénique des bactéries ».
2. Devient Geobacillus stearothermophilus.
Ces spores bactériennes peuvent être observées :
- à l’état frais, sans coloration : des spores libres ou encore dans leurs sporanges sont visibles grâce à leur réfringence à la lumière ;
- sur une coloration de Gram : les bactéries capables de sporuler sont Gram+,
mais elles deviennent en vieillissant Gram- Les cellules végétatives sont donc
colorées en violet ainsi que les sporanges, les spores rosées ou non colorées. Les
spores libres apparaissent avec un contour rose violacé et un intérieur rose pâle ;
en effet, les colorants de la coloration de Gram ne peuvent pas pénétrer dans les
spores, protégées par leurs enveloppes ;
- sur une coloration spécifique à chaud : parfois réalisée en routine, cette coloration facilite le repérage des spores lorsqu’elles sont rares dans un produit. Elle
permet aussi de préciser la forme de la spore et sa position dans le sporange.
► Coloration classique des spores bactériennes
Réaliser un frottis de la culture bactérienne à étudier, puis :
-le recouvrir d’une solution aqueuse de vert malachite à 0,5 % (cf. infra,
tableau 44). Chauffer pendant quelques minutes, sur une platine chauffante,
jusqu’à émission de vapeurs. Rajouter du colorant pendant le chauffage si nécessaire, sans jamais laisser évaporer complètement le colorant ;
- laver à l’eau distillée ;
|
- colorer avec de la safranine (cf infra, tableau 44) pendant 30 secondes.
Les cellules végétatives apparaissent colorées en rouge, les spores en vert dans
* leurs sporanges rouges et les spores libres colorées en vert.
g
Tableau 44 ■ Composition chimique des colorants de la coloration des spores
Vert malachite
Vert malachite
............................... ..................... 0.5 g
Eau distillée .............................................................................................. ..................... 100 mL
Safranine
Safranine
................................... ..................... 0.5 g
Eau distillée .............................................................................................. ..................... 100 mL