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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
- plonger l'instrument dans 1 mL d’eau distillée stérile, et laisser les bactéries
se séparer d’elles-mêmes jusqu’à l’obtention d’une suspension légèrement
opalescente ;
- déposer à une extrémité de la lame deux gouttes de la suspension
précédente ; incliner la lame et laisser les deux gouttes s’écouler sur toute la longueur de la lame ;
- laisser sécher (ne pas fixer) et colorer par la méthode choisie.
► Méthode de Leifson
La méthode de Leifson, utilisant le colorant de Leifson (cf. infra, tableau 42)
est réalisée de la manière suivante :
- recouvrir la lame de colorant de Leifson à l’aide d’une pipette Pasteur stérile
dont on place l’extrémité au contact de la lame pendant l’écoulement ;
- laisser agir 10 minutes environ ;
- laver immédiatement à l’eau distillée sans rejeter au préalable le colorant;
- sécher la préparation et observer au microscope à l'objectif x 100 à immersion.
Les cellules bactériennes apparaissent colorées en rouge vif, les flagelles ou
cils en rouge (ou rose).
Tableau 42 ■ Composition chimique du colorant de Leifson.
Colorant de Leifson
Solution à 3 % de tanin à l’éther ou à l’alcool en eau distillée
Solution à 1.5 % de NaCl en eau distillée
Solution alcoolique de fuchsine à 5 % dans l’alcool à 95°
Mélanger à parties égales les trois solutions ci-dessus ; le colorant ainsi obtenu
se conserve quelques semaines au froid.
43.4.3. Coloration des spores bactériennes
Certaines bactéries, telles que Bacillus, Clostridium, Sporosarcina... ont deux
formes d'existence :
- la cellule végétative ;
- la forme de résistance aux mauvaises conditions de vie ou d’environnement
avec la spore bactérienne, dénommée endospore.
A I intérieur d une cellule végétative, le phénomène de sporulation conduit en
plusieurs étapes et en sept heures environ à la formation d'une spore qui, de par
sa structure et sa composition chimique, est multirésistante (thermorésistance,
résistance aux agents physico-chimiques, longévité).
Dans cette cellule, devenue sporange au cours de la sporulation, la spore ovale
ou sphérique se forme dans une position déterminée, utilisée en taxonomie
(< I tableau 43). Elle se libérera ensuite du sporange et deviendra une spore libre,
qui pourra germer et donner une nouvelle cellule végétative lorsqu’elle rencontrera des conditions de culture favorables.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
- plonger l'instrument dans 1 mL d’eau distillée stérile, et laisser les bactéries
se séparer d’elles-mêmes jusqu’à l’obtention d’une suspension légèrement
opalescente ;
- déposer à une extrémité de la lame deux gouttes de la suspension
précédente ; incliner la lame et laisser les deux gouttes s’écouler sur toute la longueur de la lame ;
- laisser sécher (ne pas fixer) et colorer par la méthode choisie.
► Méthode de Leifson
La méthode de Leifson, utilisant le colorant de Leifson (cf. infra, tableau 42)
est réalisée de la manière suivante :
- recouvrir la lame de colorant de Leifson à l’aide d’une pipette Pasteur stérile
dont on place l’extrémité au contact de la lame pendant l’écoulement ;
- laisser agir 10 minutes environ ;
- laver immédiatement à l’eau distillée sans rejeter au préalable le colorant;
- sécher la préparation et observer au microscope à l'objectif x 100 à immersion.
Les cellules bactériennes apparaissent colorées en rouge vif, les flagelles ou
cils en rouge (ou rose).
Tableau 42 ■ Composition chimique du colorant de Leifson.
Colorant de Leifson
Solution à 3 % de tanin à l’éther ou à l’alcool en eau distillée
Solution à 1.5 % de NaCl en eau distillée
Solution alcoolique de fuchsine à 5 % dans l’alcool à 95°
Mélanger à parties égales les trois solutions ci-dessus ; le colorant ainsi obtenu
se conserve quelques semaines au froid.
43.4.3. Coloration des spores bactériennes
Certaines bactéries, telles que Bacillus, Clostridium, Sporosarcina... ont deux
formes d'existence :
- la cellule végétative ;
- la forme de résistance aux mauvaises conditions de vie ou d’environnement
avec la spore bactérienne, dénommée endospore.
A I intérieur d une cellule végétative, le phénomène de sporulation conduit en
plusieurs étapes et en sept heures environ à la formation d'une spore qui, de par
sa structure et sa composition chimique, est multirésistante (thermorésistance,
résistance aux agents physico-chimiques, longévité).
Dans cette cellule, devenue sporange au cours de la sporulation, la spore ovale
ou sphérique se forme dans une position déterminée, utilisée en taxonomie
(< I tableau 43). Elle se libérera ensuite du sporange et deviendra une spore libre,
qui pourra germer et donner une nouvelle cellule végétative lorsqu’elle rencontrera des conditions de culture favorables.