Méthodes de travail en microbiologie
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Le sérum coloré par le fuchsine de Ziehl du Gram teinte le fond de la préparation en rose. Les capsules apparaissent comme des halos clairs non colorés
entourant des bactéries colorées en rose (Gram-) ou en violet (Gram+).
► Troisième exemple : coloration à la nigrosine
Déposer sur une lame propre une goutte de nigrosine (cf. infra, tableau 41) et
une goutte de culture en bouillon de la souche bactérienne ; laisser sécher.
Sur un fond noir dû à la nigrosine, les cellules bactériennes sont entourées
d’un halo incolore (capsule).
T ableau 41 ■ Composition chimique du colorant à la nigrosine.
Colorant à la nigrosine
Nigrosine
10g
Dissoudre la nigrosine dans l’eau. Immerger dans un bain-marie bouillant pendant 30 minutes, puis ajouter 0,5 mL de formol. Filtrer à travers un double papier
filtre.
4.3.4.2. Coloration des cils ou flagelles
Les cils ou flagelles sont des organes de locomotion des bactéries mobiles
(entérobactéries mobiles dont Escherichia coli, Proteus vulgaris.... Pseudomonas aeruginosa, Bacillus, Clostridium...) classées dans les eubactéries (cf avantpropos, tableau 1).
Ils sont disposés sur la cellule bactérienne suivant deux dispositions :
-ciliation polaire avec un ou plusieurs cils disposés à une ou aux deux extrémités de la cellule. La cellule monotriche possède un seul cil (Vibrio cholerae,
Pseudomonas aeruginosa...) ; la cellule lophotriche ou multitriche a plusieurs
cils à un pôle (Pseudomonas fluorescens...) ou un à plusieurs cils aux deux pôles
(Spirillum...) ;
-ciliation périphérique avec de nombreux cils implantés sur toute la surface
de la cellule. La cellule est dite péritriche (entérobactéries mobiles : Escherichia
coli, Proteus, Enterobacter, Serratia..., Bacillus...).
Les cils sont invisibles à l’état frais au microscope photonique à fond clair
§ couramment utilisé. Pour les mettre en évidence, il faut préparer des frottis bac® tériens, épaissir les flagelles en les chargeant de colorant après un mordançage.
| ► Préparation des frottis
Elle exige l'utilisation de cultures bactériennes jeunes et des soins minutieux
| en raison de l’extrême fragilité des cils :
£
- prendre une lame très propre et sèche ;
!
-prélever un inoculum d'une culture jeune sur gélose (Proteus vulgaris, par
exemple) à l'aide de l'anse de platine (ou d'une pipette Pasteur boutonnée
© stérile) ;
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Le sérum coloré par le fuchsine de Ziehl du Gram teinte le fond de la préparation en rose. Les capsules apparaissent comme des halos clairs non colorés
entourant des bactéries colorées en rose (Gram-) ou en violet (Gram+).
► Troisième exemple : coloration à la nigrosine
Déposer sur une lame propre une goutte de nigrosine (cf. infra, tableau 41) et
une goutte de culture en bouillon de la souche bactérienne ; laisser sécher.
Sur un fond noir dû à la nigrosine, les cellules bactériennes sont entourées
d’un halo incolore (capsule).
T ableau 41 ■ Composition chimique du colorant à la nigrosine.
Colorant à la nigrosine
Nigrosine
10g
Dissoudre la nigrosine dans l’eau. Immerger dans un bain-marie bouillant pendant 30 minutes, puis ajouter 0,5 mL de formol. Filtrer à travers un double papier
filtre.
4.3.4.2. Coloration des cils ou flagelles
Les cils ou flagelles sont des organes de locomotion des bactéries mobiles
(entérobactéries mobiles dont Escherichia coli, Proteus vulgaris.... Pseudomonas aeruginosa, Bacillus, Clostridium...) classées dans les eubactéries (cf avantpropos, tableau 1).
Ils sont disposés sur la cellule bactérienne suivant deux dispositions :
-ciliation polaire avec un ou plusieurs cils disposés à une ou aux deux extrémités de la cellule. La cellule monotriche possède un seul cil (Vibrio cholerae,
Pseudomonas aeruginosa...) ; la cellule lophotriche ou multitriche a plusieurs
cils à un pôle (Pseudomonas fluorescens...) ou un à plusieurs cils aux deux pôles
(Spirillum...) ;
-ciliation périphérique avec de nombreux cils implantés sur toute la surface
de la cellule. La cellule est dite péritriche (entérobactéries mobiles : Escherichia
coli, Proteus, Enterobacter, Serratia..., Bacillus...).
Les cils sont invisibles à l’état frais au microscope photonique à fond clair
§ couramment utilisé. Pour les mettre en évidence, il faut préparer des frottis bac® tériens, épaissir les flagelles en les chargeant de colorant après un mordançage.
| ► Préparation des frottis
Elle exige l'utilisation de cultures bactériennes jeunes et des soins minutieux
| en raison de l’extrême fragilité des cils :
£
- prendre une lame très propre et sèche ;
!
-prélever un inoculum d'une culture jeune sur gélose (Proteus vulgaris, par
exemple) à l'aide de l'anse de platine (ou d'une pipette Pasteur boutonnée
© stérile) ;