Méthodes de travail en microbiologie
113
Recouvrir avec la solution de Gabett (à base de bleu de méthylène, d'acide
sulfurique concentré et d'alcool éthylique dénaturé) et laisser en contact une
minute. Rincer doucement à l’eau et sécher.
Observer au microscope. Les mycobactéries apparaissent sous forme de
bacilles colorés en rouge.
© Lavoisier
- La
photocopie non
autorisée
est un
délit
4.3.3. Colorations à fluorochromes
Des colorations connues depuis une trentaine d'années utilisent des fluorochromes, l’auramine pour colorer les Mycobactéries {Mycobacterium tuberculosis subsp. tuberculosis en particulier) et un contre-colorant, le rouge thiazine ou
l’acridine orange. Les préparations sont observées avec un microscope à fluorescence à lumière incidente transmise dans l’ultraviolet.
► Une coloration à l’auramine
Une coloration à l’auramine est décrite, mais celle-ci peut comporter des
variantes ; la composition chimique des produits intervenant dans cette coloration est donnée dans le tableau 40.
Préparer un frottis à partir d’un produit pathologique (crachats...) ou d'une
culture bactérienne pure de mycobactérie en le fixant à l’alcool méthylique pendant 5 à 10 minutes, puis :
- recouvrir la préparation de la solution d’auramine pendant 15 à 20 minutes ;
- laver soigneusement à l’eau distillée ;
- décolorer par l’acide-alcool pendant 5 à 10 minutes ;
- laver de nouveau à l’eau distillée ;
- recouvrir la préparation de la solution de rouge thiazine pendant 1 minute 30
ou 2 minutes selon la qualité de la solution ;
- laver et sécher.
Observer au microscope à fluorescence. Rechercher tout d’abord les bacilles
fluorescents au grossissement x40, puis au fort grossissement x 100 à immersion.
Les bacilles acido-alcoolo-résistants sont fluorescents car ils émettent une
lumière fluorescente jaune-vert due à l’auramine, les autres bactéries ou éléments
de la préparation sont colorés en rouge par le contre-colorant.
tableau 40 ■ Composition chimique des produits utilisés dans cette coloration.
Solution d’auramine
Auramine 00
......................................... .................
1 g
Eau distillée ................................................................................................ .................. 1 000 mL
Solution d'alcool-acide
Alcool à 90°
................................... .................. 1 (XX) mL
HCl concentré.............................................................................................. .................
5 mL
Solution de rouge thiazine
Rouge thiazine ...................................................... ..................................... .................
Ig
1 (XX) mL
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Recouvrir avec la solution de Gabett (à base de bleu de méthylène, d'acide
sulfurique concentré et d'alcool éthylique dénaturé) et laisser en contact une
minute. Rincer doucement à l’eau et sécher.
Observer au microscope. Les mycobactéries apparaissent sous forme de
bacilles colorés en rouge.
© Lavoisier
- La
photocopie non
autorisée
est un
délit
4.3.3. Colorations à fluorochromes
Des colorations connues depuis une trentaine d'années utilisent des fluorochromes, l’auramine pour colorer les Mycobactéries {Mycobacterium tuberculosis subsp. tuberculosis en particulier) et un contre-colorant, le rouge thiazine ou
l’acridine orange. Les préparations sont observées avec un microscope à fluorescence à lumière incidente transmise dans l’ultraviolet.
► Une coloration à l’auramine
Une coloration à l’auramine est décrite, mais celle-ci peut comporter des
variantes ; la composition chimique des produits intervenant dans cette coloration est donnée dans le tableau 40.
Préparer un frottis à partir d’un produit pathologique (crachats...) ou d'une
culture bactérienne pure de mycobactérie en le fixant à l’alcool méthylique pendant 5 à 10 minutes, puis :
- recouvrir la préparation de la solution d’auramine pendant 15 à 20 minutes ;
- laver soigneusement à l’eau distillée ;
- décolorer par l’acide-alcool pendant 5 à 10 minutes ;
- laver de nouveau à l’eau distillée ;
- recouvrir la préparation de la solution de rouge thiazine pendant 1 minute 30
ou 2 minutes selon la qualité de la solution ;
- laver et sécher.
Observer au microscope à fluorescence. Rechercher tout d’abord les bacilles
fluorescents au grossissement x40, puis au fort grossissement x 100 à immersion.
Les bacilles acido-alcoolo-résistants sont fluorescents car ils émettent une
lumière fluorescente jaune-vert due à l’auramine, les autres bactéries ou éléments
de la préparation sont colorés en rouge par le contre-colorant.
tableau 40 ■ Composition chimique des produits utilisés dans cette coloration.
Solution d’auramine
Auramine 00
......................................... .................
1 g
Eau distillée ................................................................................................ .................. 1 000 mL
Solution d'alcool-acide
Alcool à 90°
................................... .................. 1 (XX) mL
HCl concentré.............................................................................................. .................
5 mL
Solution de rouge thiazine
Rouge thiazine ...................................................... ..................................... .................
Ig
1 (XX) mL