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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Puis laver à l’eau distillée.
Décolorer en plongeant la lame pendant 2 minutes dans un tube de Borrel
contenant de l'acide sulfurique au 1/4 (ou de l’acide nitrique au 1/3).
Laver de nouveau à l’eau distillée.
Décolorer enfin par de l’alcool à 95° pendant 5 minutes et laver à l’eau distillée.
À ce stade de la coloration, seules les mycobactéries restent colorées en rouge.
Recolorer le fond de la préparation au moyen d’un colorant de contraste, le
bleu de méthylène phéniqué, pendant 30 secondes.
Laver et sécher (c/. supra, paragraphe 4.3.1.1. pour la composition des deux
colorants).
Examiner au microscope à l'objectif x 100 à immersion.
Les mycobactéries sont colorées en rouge sur le fond bleu de la préparation et
elles sont dites Ziehl+, alors que toutes les autres bactéries sont colorées en bleu
et sont Ziehl—.
La quasi totalité des bactéries ne résiste pas à la décoloration à l’acide et à
l'alcool ; seules les mycobactéries et quelques rares bactéries (actinomycètes :cf.
annexe générale 3), possédant des lipides dans leur paroi, sont acido-alcoolorésistantes (AAR).
► Applications
Cette coloration double est différentielle, mais contrairement à la coloration de
Gram, elle est surtout utile pour le diagnostic des mycobactéries (Mycobacterium
tuberculosis subsp. tuberculosis...) en bactériologie médicale.
Elle est utilisée par certains laboratoires d’analyses biologiques (cf collège de
bactériologie-virologie sur site http://lyon-sud.univ-lyonl.fr) pour vérifier les
résultats obtenus avec la coloration fluorescente à l’acridine orange (cf infra,
paragraphe 4.3.3.).
Modifiée par Polack, la coloration de Ziehl-Neelsen a trouvé une autre
application : elle est recommandée pour la mise en évidence des kystes de Cryptosporidium parvum qui se différencient des autres ookystes par leur petite taille
(http://www.vet-lyon.tr/etu/copro/sommaire/techniques/analyse/colo..., 2004).
Ce protozoaire parasite intracellulaire, transmissible par des eaux contaminées
est responsable de diarrhées et doit être recherché dans les eaux destinées à la
consommation humaine dans certains cas (Delarras et Trébaol, 2003).
Par ailleurs. Mycobacterium tuberculosis subsp. tuberculosis peut être exceptionnellement recherchée dans les eaux de piscines, les eaux usées, les boues de
décantation des stations d épuration d'eaux usées.
► Méthode de I an-1 hiam-Hok (à froid) d'après bioMérieux® SA
Recouvrir le frottis préparé avec la solution de Kinyoun (à base de fuchsine
basique, de phénol et d alcool éthylique dénaturé) et laisser en contact pendant
trois minutes. Rincer doucement à l’eau.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Puis laver à l’eau distillée.
Décolorer en plongeant la lame pendant 2 minutes dans un tube de Borrel
contenant de l'acide sulfurique au 1/4 (ou de l’acide nitrique au 1/3).
Laver de nouveau à l’eau distillée.
Décolorer enfin par de l’alcool à 95° pendant 5 minutes et laver à l’eau distillée.
À ce stade de la coloration, seules les mycobactéries restent colorées en rouge.
Recolorer le fond de la préparation au moyen d’un colorant de contraste, le
bleu de méthylène phéniqué, pendant 30 secondes.
Laver et sécher (c/. supra, paragraphe 4.3.1.1. pour la composition des deux
colorants).
Examiner au microscope à l'objectif x 100 à immersion.
Les mycobactéries sont colorées en rouge sur le fond bleu de la préparation et
elles sont dites Ziehl+, alors que toutes les autres bactéries sont colorées en bleu
et sont Ziehl—.
La quasi totalité des bactéries ne résiste pas à la décoloration à l’acide et à
l'alcool ; seules les mycobactéries et quelques rares bactéries (actinomycètes :cf.
annexe générale 3), possédant des lipides dans leur paroi, sont acido-alcoolorésistantes (AAR).
► Applications
Cette coloration double est différentielle, mais contrairement à la coloration de
Gram, elle est surtout utile pour le diagnostic des mycobactéries (Mycobacterium
tuberculosis subsp. tuberculosis...) en bactériologie médicale.
Elle est utilisée par certains laboratoires d’analyses biologiques (cf collège de
bactériologie-virologie sur site http://lyon-sud.univ-lyonl.fr) pour vérifier les
résultats obtenus avec la coloration fluorescente à l’acridine orange (cf infra,
paragraphe 4.3.3.).
Modifiée par Polack, la coloration de Ziehl-Neelsen a trouvé une autre
application : elle est recommandée pour la mise en évidence des kystes de Cryptosporidium parvum qui se différencient des autres ookystes par leur petite taille
(http://www.vet-lyon.tr/etu/copro/sommaire/techniques/analyse/colo..., 2004).
Ce protozoaire parasite intracellulaire, transmissible par des eaux contaminées
est responsable de diarrhées et doit être recherché dans les eaux destinées à la
consommation humaine dans certains cas (Delarras et Trébaol, 2003).
Par ailleurs. Mycobacterium tuberculosis subsp. tuberculosis peut être exceptionnellement recherchée dans les eaux de piscines, les eaux usées, les boues de
décantation des stations d épuration d'eaux usées.
► Méthode de I an-1 hiam-Hok (à froid) d'après bioMérieux® SA
Recouvrir le frottis préparé avec la solution de Kinyoun (à base de fuchsine
basique, de phénol et d alcool éthylique dénaturé) et laisser en contact pendant
trois minutes. Rincer doucement à l’eau.