Méthodes de travail en microbiologie
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méthode classique qui se réalise à chaud, y compris des méthodes rapides à
froid :
- « Kit K » de coloration acide et rapide des mycobactéries à froid selon
Kinyoun chez Fisher Bioblock Scientific™ (annexe générale 8 « Quelques adresses utiles de sociétés commercialisant du matériel de microbiologie ») ;
- solution de Kinyoun et de Gabett bioMérieux'5 SA pour la coloration des
mycobactéries à froid par la méthode de Tan-Thiam-Hok (cf. infra, même paragraphe) et à chaud ou à froid par la méthode de Devulder.
► Mode opératoire
Préparer un frottis à partir :
- d’un produit pathologique (crachats, prélèvement « lavage bronchique ») ;
- d’une culture bactérienne pure de mycobactérie (Mycobacterium aviurn ou
Mycobacterium phlei en travaux pratiques de microbiologie).
Les cultures de mycobactéries peuvent être préparées sur la pente d’un milieu
Coletsos en tube.
La formule théorique en g/L d’eau purifiée du milieu Coletsos bioMérieux
SA est :
Peptone de gélatine (porcin ou bovin)...............................................
6.4
Fécule de pomme de terre ................................................................... 16,0
Glycérol .................................................................................................
7,4 mL
Solution oligo-dynamique de Berthelot....................................................
LO mL
Œuf entier........................................................................................................490,0 mL
Jaunes d’œufs seuls ................................................................................125,0mL
Phosphate monopotassique ................................................................. 2,4
Sulfate de magnésium .........................................................................
0,24
Citrate de magnésium............................................................................ 0,6,—
L-Asparagine ......................................................................................... 3,6
Pyruvate de sodium ..............................................................................
L6
Glutamate de sodium............................................................................
L6
Bleu de tournesol..................................................................................
0*25
Vert malachite ......................................................................................
0.32
pH 7,0
।
Ce milieu est disponible en tubes prêts à l'emploi, à employer en respectant
§ toutes les précautions d’utilisation du fabricant.
L'œuf, la solution d’oligo-éléments et le pyruvate de sodium facilitent la crois| sance des mycobactéries dont Mycobacterium tuberculosis subsp. tubercu/osis.
= ► Méthode classique (à chaud) de la coloration de Ziehl-Neelsen
|
Recouvrir le frottis de fuchsine de Ziehl pure.
Chauffer sur une platine chauffante jusqu'à émission de vapeurs ; laisser les
1 vapeurs se dissiper et recommencer l’opération trois fois au total, en rajoutant
g éventuellement de la fuchsine.
La coloration doit durer 10 minutes environ et le colorant ne doit jamais bouillir.
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méthode classique qui se réalise à chaud, y compris des méthodes rapides à
froid :
- « Kit K » de coloration acide et rapide des mycobactéries à froid selon
Kinyoun chez Fisher Bioblock Scientific™ (annexe générale 8 « Quelques adresses utiles de sociétés commercialisant du matériel de microbiologie ») ;
- solution de Kinyoun et de Gabett bioMérieux'5 SA pour la coloration des
mycobactéries à froid par la méthode de Tan-Thiam-Hok (cf. infra, même paragraphe) et à chaud ou à froid par la méthode de Devulder.
► Mode opératoire
Préparer un frottis à partir :
- d’un produit pathologique (crachats, prélèvement « lavage bronchique ») ;
- d’une culture bactérienne pure de mycobactérie (Mycobacterium aviurn ou
Mycobacterium phlei en travaux pratiques de microbiologie).
Les cultures de mycobactéries peuvent être préparées sur la pente d’un milieu
Coletsos en tube.
La formule théorique en g/L d’eau purifiée du milieu Coletsos bioMérieux
SA est :
Peptone de gélatine (porcin ou bovin)...............................................
6.4
Fécule de pomme de terre ................................................................... 16,0
Glycérol .................................................................................................
7,4 mL
Solution oligo-dynamique de Berthelot....................................................
LO mL
Œuf entier........................................................................................................490,0 mL
Jaunes d’œufs seuls ................................................................................125,0mL
Phosphate monopotassique ................................................................. 2,4
Sulfate de magnésium .........................................................................
0,24
Citrate de magnésium............................................................................ 0,6,—
L-Asparagine ......................................................................................... 3,6
Pyruvate de sodium ..............................................................................
L6
Glutamate de sodium............................................................................
L6
Bleu de tournesol..................................................................................
0*25
Vert malachite ......................................................................................
0.32
pH 7,0
।
Ce milieu est disponible en tubes prêts à l'emploi, à employer en respectant
§ toutes les précautions d’utilisation du fabricant.
L'œuf, la solution d’oligo-éléments et le pyruvate de sodium facilitent la crois| sance des mycobactéries dont Mycobacterium tuberculosis subsp. tubercu/osis.
= ► Méthode classique (à chaud) de la coloration de Ziehl-Neelsen
|
Recouvrir le frottis de fuchsine de Ziehl pure.
Chauffer sur une platine chauffante jusqu'à émission de vapeurs ; laisser les
1 vapeurs se dissiper et recommencer l’opération trois fois au total, en rajoutant
g éventuellement de la fuchsine.
La coloration doit durer 10 minutes environ et le colorant ne doit jamais bouillir.