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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Le principe général de la coloration de Gram, la composition chimique des
colorants du Gram Hucker et une variante de cette coloration avec la technique
« Color Gram 2 » bioMérieux^ SA ont déjà été présentés (Delarras et Trébaol.
2(X)3). Des fabricants de produits de microbiologie proposent des coffrets complets prêts à l’emploi pour la réalisation du Gram traditionnel ou selon Hucker
(Gram 3 étapes formulation Difco™ ou Gram traditionnel Difco, Kit Gram Hucker R AL avec différentiateur d’action rapide et Kit Gram-Color Merck (VWR™
International)...
C'est la technique de la coloration de Gram, modifiée par Hucker en 1902, dite
Gram Hucker, qui fait l’objet d’une présentation normalisée en microbiologie
alimentaire (cf. norme Afnor NF ISO 7218). Le protocole est le suivant :
- préparer un frottis d’un produit pathologique ou d’une culture bactérienne pure .
- recouvrir le frottis de violet cristal oxalaté ; laisser agir 1 minute ; rincera
l'eau distillée ;
- verser du Lugol et le laisser agir pendant 1 minute ; rincer à l'eau distillée;
- décolorer à l'alcool à 95°, entre 15 et 30 secondes (selon les auteurs) ; rincer
à l’eau distillée ;
- recolorer avec de la safranine pendant 10 à 30 secondes ; rincer à l'eau distillée:
- sécher au-dessus de la flamme d’un bec Bunsen.
La safranine peut être remplacée par de la fuchsine de Ziehl diluée au 1/10
pendant 1 minute.
Observer au microscope à l'objectif x 100 à immersion.
Avec cette coloration double, les bactéries « Gram-positif » apparaissent en
violet foncé tandis que les bactéries « Gram-négatif » sont colorées en rose ou en
rouge.
► Application
La coloration de Gram permet donc de diviser le monde des bactéries en deux
groupes distincts, mais certaines bactéries peuvent présenter un Gram variable
(cf. deuxième partie, chapitre 6 « Listeria », tableau 98).
Cette coloration est toujours réalisée en routine lors des premiers examens de
produits pathologiques en bactériologie médicale ; elle permet en général
d apprécier la pureté des souches bactériennes avant toute identification.
43.2.2. Coloration de Ziehl-Neelsen
C cite coloration double sert essentiellement à la coloration des mycobactéries
। Mm obacterium tuherculosis subsp. tuberculosis ou bacille de Koch. Mycohactciiuni leprae ou bacille de la lèpre de Hansen... (cf. annexe générale 3
« C lassification phylogénique des bactéries »), à partir de produits pathologiques
ou de cultures bactériennes pures de laboratoire.
Robert Koch découvre en 1882 le bacille de Koch et Erlich la propriété
d acido-alcoolo-résistance (AAR) de cette bactérie; mais ce sont Ziehl et
Neclscn qui mettent au point en 1882-1883 une coloration qui sera ensuite
dénommée coloration de Ziehl-Neelsen. Il existe plusieurs variantes de la
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Le principe général de la coloration de Gram, la composition chimique des
colorants du Gram Hucker et une variante de cette coloration avec la technique
« Color Gram 2 » bioMérieux^ SA ont déjà été présentés (Delarras et Trébaol.
2(X)3). Des fabricants de produits de microbiologie proposent des coffrets complets prêts à l’emploi pour la réalisation du Gram traditionnel ou selon Hucker
(Gram 3 étapes formulation Difco™ ou Gram traditionnel Difco, Kit Gram Hucker R AL avec différentiateur d’action rapide et Kit Gram-Color Merck (VWR™
International)...
C'est la technique de la coloration de Gram, modifiée par Hucker en 1902, dite
Gram Hucker, qui fait l’objet d’une présentation normalisée en microbiologie
alimentaire (cf. norme Afnor NF ISO 7218). Le protocole est le suivant :
- préparer un frottis d’un produit pathologique ou d’une culture bactérienne pure .
- recouvrir le frottis de violet cristal oxalaté ; laisser agir 1 minute ; rincera
l'eau distillée ;
- verser du Lugol et le laisser agir pendant 1 minute ; rincer à l'eau distillée;
- décolorer à l'alcool à 95°, entre 15 et 30 secondes (selon les auteurs) ; rincer
à l’eau distillée ;
- recolorer avec de la safranine pendant 10 à 30 secondes ; rincer à l'eau distillée:
- sécher au-dessus de la flamme d’un bec Bunsen.
La safranine peut être remplacée par de la fuchsine de Ziehl diluée au 1/10
pendant 1 minute.
Observer au microscope à l'objectif x 100 à immersion.
Avec cette coloration double, les bactéries « Gram-positif » apparaissent en
violet foncé tandis que les bactéries « Gram-négatif » sont colorées en rose ou en
rouge.
► Application
La coloration de Gram permet donc de diviser le monde des bactéries en deux
groupes distincts, mais certaines bactéries peuvent présenter un Gram variable
(cf. deuxième partie, chapitre 6 « Listeria », tableau 98).
Cette coloration est toujours réalisée en routine lors des premiers examens de
produits pathologiques en bactériologie médicale ; elle permet en général
d apprécier la pureté des souches bactériennes avant toute identification.
43.2.2. Coloration de Ziehl-Neelsen
C cite coloration double sert essentiellement à la coloration des mycobactéries
। Mm obacterium tuherculosis subsp. tuberculosis ou bacille de Koch. Mycohactciiuni leprae ou bacille de la lèpre de Hansen... (cf. annexe générale 3
« C lassification phylogénique des bactéries »), à partir de produits pathologiques
ou de cultures bactériennes pures de laboratoire.
Robert Koch découvre en 1882 le bacille de Koch et Erlich la propriété
d acido-alcoolo-résistance (AAR) de cette bactérie; mais ce sont Ziehl et
Neclscn qui mettent au point en 1882-1883 une coloration qui sera ensuite
dénommée coloration de Ziehl-Neelsen. Il existe plusieurs variantes de la