Méthodes de travail en microbiologie
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sans altérer leur efficacité, car ce produit s’est avéré nuisible à notre environnement de travail.
Tableau 37 ■ Composition chimique du bleu de toluidine.
Bleu de toluidine ............................................................................................................
1 g
Carbonate de lithium ...................................................................................................... 0,5 g
Eau distillée .....................................................................................................................
75 mL
Après dissolution, ajouter
Glycérine .........................................................................................................................
20 g
Alcool à 95°.....................................................................................................................
5 mL
Tableau 38 ■ Composition chimique du bleu de méthylène phéniqué.
Bleu de méthylène (spécial microbiologie)..................................................................
20 g
Acide phéniqué................................................................................................................
20 g
Alcool à 95°..................................................................................................................... 100 mL
Broyer et mélanger les composants ci-dessus dans un mortier. Ajouter 100 à
200 mL d’eau distillée et laisser reposer 24 heures. Compléter à 1 000 mL. Conserver en flacon bouché. Filtrer à nouveau avant emploi.
Tableau 39 ■ Composition chimique de la fuchsine phéniquée de Ziehl.
Fuchsine basique ............................................................................................................
1 g
Acide phéniqué cristallisé ..............................................................................................
5 g
Alcool à 95°........................................................................................................................
10 mL
Broyer dans un mortier les composants ci-dessus. Ajouter 10 à 20 mL d'eau distillée chaude et laisser reposer 24 heures. Compléter à 100 mL. Filtrer. Conserver
en flacon bouché. Filtrer à nouveau avant emploi.
4.3.1.2. Technique
Préparer un frottis du produit ou de la culture bactérienne à examiner, puis :
- répandre quelques gouttes de colorant sur celui-ci et laisser en contact une à
deux minutes ;
-
laver abondamment à l’eau distillée ;
- sécher dans la flamme d'un bec Bunsen ou sur une platine chauffante. Examiner au microscope à l'objectif x 100 à immersion.
Les bactéries, quelle que soit l’espèce, sont colorées en bleu-mauve avec le
5 bleu de toluidine, en bleu avec le bleu de méthylène phéniqué et en rouge avec
| la fuchsine phéniquée de Ziehl. Ces colorations simples n'assurent aucune difféè rentiation entre les bactéries, contrairement aux colorations doubles.
| 4.3.2. Colorations doubles ou différentielles
| 4.3.2.1. Coloration de Gram
Cette coloration ancienne, découverte par Hans Christian Joachim Gram en
g 1884, modifiée à plusieurs reprises, demeure fondamentale plus de 120 ans plus
a tard, en bactériologie.
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sans altérer leur efficacité, car ce produit s’est avéré nuisible à notre environnement de travail.
Tableau 37 ■ Composition chimique du bleu de toluidine.
Bleu de toluidine ............................................................................................................
1 g
Carbonate de lithium ...................................................................................................... 0,5 g
Eau distillée .....................................................................................................................
75 mL
Après dissolution, ajouter
Glycérine .........................................................................................................................
20 g
Alcool à 95°.....................................................................................................................
5 mL
Tableau 38 ■ Composition chimique du bleu de méthylène phéniqué.
Bleu de méthylène (spécial microbiologie)..................................................................
20 g
Acide phéniqué................................................................................................................
20 g
Alcool à 95°..................................................................................................................... 100 mL
Broyer et mélanger les composants ci-dessus dans un mortier. Ajouter 100 à
200 mL d’eau distillée et laisser reposer 24 heures. Compléter à 1 000 mL. Conserver en flacon bouché. Filtrer à nouveau avant emploi.
Tableau 39 ■ Composition chimique de la fuchsine phéniquée de Ziehl.
Fuchsine basique ............................................................................................................
1 g
Acide phéniqué cristallisé ..............................................................................................
5 g
Alcool à 95°........................................................................................................................
10 mL
Broyer dans un mortier les composants ci-dessus. Ajouter 10 à 20 mL d'eau distillée chaude et laisser reposer 24 heures. Compléter à 100 mL. Filtrer. Conserver
en flacon bouché. Filtrer à nouveau avant emploi.
4.3.1.2. Technique
Préparer un frottis du produit ou de la culture bactérienne à examiner, puis :
- répandre quelques gouttes de colorant sur celui-ci et laisser en contact une à
deux minutes ;
-
laver abondamment à l’eau distillée ;
- sécher dans la flamme d'un bec Bunsen ou sur une platine chauffante. Examiner au microscope à l'objectif x 100 à immersion.
Les bactéries, quelle que soit l’espèce, sont colorées en bleu-mauve avec le
5 bleu de toluidine, en bleu avec le bleu de méthylène phéniqué et en rouge avec
| la fuchsine phéniquée de Ziehl. Ces colorations simples n'assurent aucune difféè rentiation entre les bactéries, contrairement aux colorations doubles.
| 4.3.2. Colorations doubles ou différentielles
| 4.3.2.1. Coloration de Gram
Cette coloration ancienne, découverte par Hans Christian Joachim Gram en
g 1884, modifiée à plusieurs reprises, demeure fondamentale plus de 120 ans plus
a tard, en bactériologie.