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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
►
Conseil pratique
Il faut régler convenablement la lumière et ne pas prolonger le temps d’observation au-delà de 3 minutes, sinon la préparation se dessèche.
4.2.2. Examen après coloration sur frottis
L’examen de bactéries fixées et colorées sur des frottis complète l’état frais,
car il permet de mieux observer les détails morphologiques des cellules bactériennes et d'orienter l’analyse d’un produit ou l’identification d’une bactérie
(bactéries Gram+ ou -, bactéries Ziehl+ ou
Pour cela, il faut tout d'abord préparer un frottis bactérien, puis le colorer.
Le frottis destiné à la coloration est préparé selon le protocole suivant :
• Étalement
Prendre une lame propre et dégraissée, faire un prélèvement du produit à examiner (cf. supra, paragraphe 4.2.1.2.) et étaler en couche mince.
• Séchage
Sécher rapidement en passant la préparation au-dessus de la flamme d’un bec
Bunsen, ou poser la lame sur une plaque chauffante électrique réglée à 37 °C.
• Fixation
Verser quelques gouttes d'alcool à 95° et enflammer. Les bactéries sont tuées
et « fixées » sur la lame (sans altération de leur structure).
•
Coloration
Le frottis pourra ensuite être soumis à une des techniques de coloration.
4.3. Techniques de coloration
Les colorations bactériennes pratiquées en routine peuvent être classées en
quatre types :
— colorations simples, faisant intervenir un seul colorant ;
- colorations doubles différentielles, qui utilisent deux colorants ;
- colorations parfois utiles ;
- colorations spécifiques à certains genres bactériens.
4.3.1. Colorations simples
Des frottis bactériens peuvent être colorés avec des colorants simples de microbiologie tels que le bleu de toluidine, le bleu de méthylène, la fuchsine phéniquée
de Ziehl... Des solutions de colorants de microbiologie prêtes à l’emploi sont
commercialisées (colorants RAL pour bactériologie VWR™ International...).
4.3.1.1. Composition chimique de trois colorants
La composition chimique de trois colorants simples de microbiologie et leur
nuxle de préparation sont donnés dans les tableaux 37, 38 et 39. En travaux pratiques de microbiologie, il a été possible d'enlever l’acide phénique des colorants
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
►
Conseil pratique
Il faut régler convenablement la lumière et ne pas prolonger le temps d’observation au-delà de 3 minutes, sinon la préparation se dessèche.
4.2.2. Examen après coloration sur frottis
L’examen de bactéries fixées et colorées sur des frottis complète l’état frais,
car il permet de mieux observer les détails morphologiques des cellules bactériennes et d'orienter l’analyse d’un produit ou l’identification d’une bactérie
(bactéries Gram+ ou -, bactéries Ziehl+ ou
Pour cela, il faut tout d'abord préparer un frottis bactérien, puis le colorer.
Le frottis destiné à la coloration est préparé selon le protocole suivant :
• Étalement
Prendre une lame propre et dégraissée, faire un prélèvement du produit à examiner (cf. supra, paragraphe 4.2.1.2.) et étaler en couche mince.
• Séchage
Sécher rapidement en passant la préparation au-dessus de la flamme d’un bec
Bunsen, ou poser la lame sur une plaque chauffante électrique réglée à 37 °C.
• Fixation
Verser quelques gouttes d'alcool à 95° et enflammer. Les bactéries sont tuées
et « fixées » sur la lame (sans altération de leur structure).
•
Coloration
Le frottis pourra ensuite être soumis à une des techniques de coloration.
4.3. Techniques de coloration
Les colorations bactériennes pratiquées en routine peuvent être classées en
quatre types :
— colorations simples, faisant intervenir un seul colorant ;
- colorations doubles différentielles, qui utilisent deux colorants ;
- colorations parfois utiles ;
- colorations spécifiques à certains genres bactériens.
4.3.1. Colorations simples
Des frottis bactériens peuvent être colorés avec des colorants simples de microbiologie tels que le bleu de toluidine, le bleu de méthylène, la fuchsine phéniquée
de Ziehl... Des solutions de colorants de microbiologie prêtes à l’emploi sont
commercialisées (colorants RAL pour bactériologie VWR™ International...).
4.3.1.1. Composition chimique de trois colorants
La composition chimique de trois colorants simples de microbiologie et leur
nuxle de préparation sont donnés dans les tableaux 37, 38 et 39. En travaux pratiques de microbiologie, il a été possible d'enlever l’acide phénique des colorants