Méthodes de travail en microbiologie
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Dans ce dernier cas, voici le protocole à appliquer pour préparer des boîtes de
Pétri, en travaux pratiques de microbiologie ou en laboratoire, sur une paillasse,
dans la « zone stérile » d’un bec Bunsen.
Verser tout d’abord le contenu du tube ou du flacon dans une boîte de Pétri
vide et stérile, en respectant les précautions suivantes :
- essuyer avec soin le tube (ou flacon) à la sortie du bain-marie ;
- enlever le bouchon (métallique ou autre) dans la « zone stérile » du bec de
gaz Bunsen et flamber l’ouverture du tube pour tuer les micro-organismes ;
- ouvrir la boîte de Pétri du côté de la flamme du bec de gaz, verser le milieu
de culture et refermer rapidement le couvercle ;
- répartir la gélose dans la boîte en agitant doucement ;
- laisser la boîte de Pétri à plat, sur la paillasse jusqu’à solidification du milieu
de culture.
2.1.2. Moyens d’ensemencement
2.1.2.1. Pipettes Pasteur boutonnées
Dans un laboratoire, prendre une pipette Pasteur boutonnée prête à l’emploi.
En travaux pratiques, prendre une pipette Pasteur non stérile à boutonner, puis,
à partir de celle-ci fabriquer dans la flamme d'un bec Bunsen une pipette Pasteur
« boutonnée ».
Après stérilisation dans un tube de Borrel contenant de l’alcool à 95° et flambage, la pipette Pasteur est utilisée pour les isolements à la surface des milieux
gélosés (cf. infra, paragraphe 2.2.1.).
2.1.2.2. Étaleurs
Préparer une pipette Pasteur coudée en forme de « U », appelée étaleur.
Après stérilisation comme ci-dessus, l’étaleur est utilisé pour l'ensemencement en nappe, c'est-à-dire pour l’étalement d'un inoculum liquide sur un milieu
gélosé en boîte de Pétri (cf. deuxième partie, chapitre 9 « Staphylococcus, Mtcrococcus et ex-Micrococcus », paragraphe 5.2.).
Dans un laboratoire, il est remplacé par un étaleur en forme de « T » à usage
unique.
2.2.
Méthode des quadrants
Les isolements des bactéries contenues dans un produit à analyser sont réalisés, selon les cas, directement et/ou indirectement :
- soit sur des milieux gélosés inclinés en tubes (cf supra, paragraphe
1.1.2.2.);
-soit, en général, sur des milieux gélosés en boîtes de Pétri, par la méthode
des quadrants et la technique des stries.
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Dans ce dernier cas, voici le protocole à appliquer pour préparer des boîtes de
Pétri, en travaux pratiques de microbiologie ou en laboratoire, sur une paillasse,
dans la « zone stérile » d’un bec Bunsen.
Verser tout d’abord le contenu du tube ou du flacon dans une boîte de Pétri
vide et stérile, en respectant les précautions suivantes :
- essuyer avec soin le tube (ou flacon) à la sortie du bain-marie ;
- enlever le bouchon (métallique ou autre) dans la « zone stérile » du bec de
gaz Bunsen et flamber l’ouverture du tube pour tuer les micro-organismes ;
- ouvrir la boîte de Pétri du côté de la flamme du bec de gaz, verser le milieu
de culture et refermer rapidement le couvercle ;
- répartir la gélose dans la boîte en agitant doucement ;
- laisser la boîte de Pétri à plat, sur la paillasse jusqu’à solidification du milieu
de culture.
2.1.2. Moyens d’ensemencement
2.1.2.1. Pipettes Pasteur boutonnées
Dans un laboratoire, prendre une pipette Pasteur boutonnée prête à l’emploi.
En travaux pratiques, prendre une pipette Pasteur non stérile à boutonner, puis,
à partir de celle-ci fabriquer dans la flamme d'un bec Bunsen une pipette Pasteur
« boutonnée ».
Après stérilisation dans un tube de Borrel contenant de l’alcool à 95° et flambage, la pipette Pasteur est utilisée pour les isolements à la surface des milieux
gélosés (cf. infra, paragraphe 2.2.1.).
2.1.2.2. Étaleurs
Préparer une pipette Pasteur coudée en forme de « U », appelée étaleur.
Après stérilisation comme ci-dessus, l’étaleur est utilisé pour l'ensemencement en nappe, c'est-à-dire pour l’étalement d'un inoculum liquide sur un milieu
gélosé en boîte de Pétri (cf. deuxième partie, chapitre 9 « Staphylococcus, Mtcrococcus et ex-Micrococcus », paragraphe 5.2.).
Dans un laboratoire, il est remplacé par un étaleur en forme de « T » à usage
unique.
2.2.
Méthode des quadrants
Les isolements des bactéries contenues dans un produit à analyser sont réalisés, selon les cas, directement et/ou indirectement :
- soit sur des milieux gélosés inclinés en tubes (cf supra, paragraphe
1.1.2.2.);
-soit, en général, sur des milieux gélosés en boîtes de Pétri, par la méthode
des quadrants et la technique des stries.