Méthodes de travail en microbiologie
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1.3.2. Repiquage de bactéries
1.3.2.1. Inoculation en milieu liquide
Le repiquage est réalisé en milieu liquide en utilisant une anse de platine calibrée ou un ensemenceur (calibré) à usage unique, ou encore une pipette Pasteur
stérile avec poire de prélèvement :
- prélever une anse d'une culture mère de Serratia marcescens subsp. marcescens sur milieu gélosé et l’ensemencer dans un tube de bouillon nutritif (repiquer
ce qui a été prélevé à l’intérieur de l’anse calibrée) ;
- inoculer à la pipette Pasteur stérile un tube de bouillon nutritif à partir d'une
culture mère en bouillon de Kocuria varions (ex-Micrococcus varions).
Incuber les tubes à 30 °C pendant 48 heures et observer.
1.3.2.2. Inoculation sur milieu gélosé
Le repiquage est réalisé en milieu solide en utilisant une anse de platine (calibrée) ou un ensemenceur (calibré) à usage unique, ou encore une pipette Pasteur
boutonnée stérile.
Ensemencer la pente d’une gélose nutritive en faisant une série de stries allers
et retours, d’un bord à l’autre de la gélose, en commençant par le pôle inférieur
du tube et en remontant peu à peu vers la partie supérieure de la gélose. Prendre
soin de ne pas érafler la gélose.
Inoculer par cette technique un tube avec Serratia marcescens subsp. marcescens et un autre tube avec Kocuria varions.
Incuber à 30 °C pendant 48 heures. Observer le développement des colonies.
1.3.2.3. Autres techniques d’inoculation des milieicx gélosés
D’autres techniques d’ensemencement de milieux gélosés en tubes ou en boîte
de Pétri, parfois utiles en pratique courante, sont décrites et illustrées d'exemples
dans le tableau 25.
Tableau 25 ■ Autres techniques d'ensemencement et applications.
Autres techniques d'ensemencement
Applications1
En strie centrale unique et longitudinale sur la
pente d'un milieu gélosé en tube (à l’anse de
platine)
Milieu de Simmons (paragraphe 2.5.)
Gélose de Loeffler en tube (paragraphe 3.1.2.)
Par piqûre centrale dans une gélose en culot
en tube (à l'anse de platine, fil droit sans
boucle)
Milieu de Hugh et Leifson glucosé (paragraphe 2.1.1.)
Gélose esculine (paragraphe 2.3.2.)
Milieu mannitol-mobilité-nitrate (paragraphe
2.2.4.1.)
Milieu nutritif SIM (paragraphe 3.5.2.)
Milieu MEVAG Staphylococcus (paragraphe
2.1.2.)
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1.3.2. Repiquage de bactéries
1.3.2.1. Inoculation en milieu liquide
Le repiquage est réalisé en milieu liquide en utilisant une anse de platine calibrée ou un ensemenceur (calibré) à usage unique, ou encore une pipette Pasteur
stérile avec poire de prélèvement :
- prélever une anse d'une culture mère de Serratia marcescens subsp. marcescens sur milieu gélosé et l’ensemencer dans un tube de bouillon nutritif (repiquer
ce qui a été prélevé à l’intérieur de l’anse calibrée) ;
- inoculer à la pipette Pasteur stérile un tube de bouillon nutritif à partir d'une
culture mère en bouillon de Kocuria varions (ex-Micrococcus varions).
Incuber les tubes à 30 °C pendant 48 heures et observer.
1.3.2.2. Inoculation sur milieu gélosé
Le repiquage est réalisé en milieu solide en utilisant une anse de platine (calibrée) ou un ensemenceur (calibré) à usage unique, ou encore une pipette Pasteur
boutonnée stérile.
Ensemencer la pente d’une gélose nutritive en faisant une série de stries allers
et retours, d’un bord à l’autre de la gélose, en commençant par le pôle inférieur
du tube et en remontant peu à peu vers la partie supérieure de la gélose. Prendre
soin de ne pas érafler la gélose.
Inoculer par cette technique un tube avec Serratia marcescens subsp. marcescens et un autre tube avec Kocuria varions.
Incuber à 30 °C pendant 48 heures. Observer le développement des colonies.
1.3.2.3. Autres techniques d’inoculation des milieicx gélosés
D’autres techniques d’ensemencement de milieux gélosés en tubes ou en boîte
de Pétri, parfois utiles en pratique courante, sont décrites et illustrées d'exemples
dans le tableau 25.
Tableau 25 ■ Autres techniques d'ensemencement et applications.
Autres techniques d'ensemencement
Applications1
En strie centrale unique et longitudinale sur la
pente d'un milieu gélosé en tube (à l’anse de
platine)
Milieu de Simmons (paragraphe 2.5.)
Gélose de Loeffler en tube (paragraphe 3.1.2.)
Par piqûre centrale dans une gélose en culot
en tube (à l'anse de platine, fil droit sans
boucle)
Milieu de Hugh et Leifson glucosé (paragraphe 2.1.1.)
Gélose esculine (paragraphe 2.3.2.)
Milieu mannitol-mobilité-nitrate (paragraphe
2.2.4.1.)
Milieu nutritif SIM (paragraphe 3.5.2.)
Milieu MEVAG Staphylococcus (paragraphe
2.1.2.)