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Microbiologie pratique pour le laboratoire d analyses ou de contrôle sanitaire
► Recommandation
Il est formellement interdit de pipeter à la bouche, même quand on pipette de
l’eau distillée stérile.
1.1.2.2. Pour les milieux solides
Pour l’ensemencement de milieux solides stériles en tubes, il est possible
d'utiliser comme instrument une pipette Pasteur boutonnée (cf. infra, paragraphe
2.1.2.).
1.2. Travail sous PSM
En microbiologie, le travail d’ensemencement et de repiquage sous PSM de
type II (type le plus fréquent) implique :
- le respect de la sécurité et des règles d’hygiène lors du travail en microbiologie (cf. première partie, chapitre 1 « Conception du laboratoire, fonctionnement
et sécurité », paragraphe 3) ;
- le port de gants stériles ;
'
- l'emploi de matériel à usage unique : ensemenceurs, étaleurs, pipettes...
1.3. Exemples d’ensemencement de micro-organismes
Afin d'illustrer et de préciser les techniques d’ensemencement et de culture
des micro-organismes, des exemples sont donnés avec des champignons (moisissures. levures) et des bactéries.
Pour la composition des milieux de culture utilisés : cf. première partie, chapitre 3, « Préparation et stérilisation du matériel et des milieux de culture », paragraphes 2.4 et 4.1.
1.3.1. Repiquage de champignons
L ensemencement se fait à l'aide du manche Pasteur avec fil de platine
recourbé à angle droit à quelques millimètres de l’extrémité (2 ou 3 mm).
Accrocher quelques filaments du mycélium de la moisissure dans le tube mère
d une moisissure et les déposer à la surface du milieu stérile d'un tube à ensemencer.
Ensemencer ainsi :
- un milieu a la carotte en tube de Roux avec Aspergillus niger (moisissure),
incuber une semaine à 25 °C environ et observer ;
( un tube de gélose au malt avec Rhizopus stolonifer var. stolonifer (exRhizopus nigricans. moisissure) ; incuber quelques jours à 25 °C et observer.
I our une levure (champignon) telle que Saccharomyces cerevisiae. prélever
un inoculum (a 1 anse de platine) et l'ensemencer en stries sur la pente d'une
gélose au malt en tube : incuber pendant 48 heures à 25 °C et observer le développement de cette levure en le comparant à celui des deux moisissures.
Microbiologie pratique pour le laboratoire d analyses ou de contrôle sanitaire
► Recommandation
Il est formellement interdit de pipeter à la bouche, même quand on pipette de
l’eau distillée stérile.
1.1.2.2. Pour les milieux solides
Pour l’ensemencement de milieux solides stériles en tubes, il est possible
d'utiliser comme instrument une pipette Pasteur boutonnée (cf. infra, paragraphe
2.1.2.).
1.2. Travail sous PSM
En microbiologie, le travail d’ensemencement et de repiquage sous PSM de
type II (type le plus fréquent) implique :
- le respect de la sécurité et des règles d’hygiène lors du travail en microbiologie (cf. première partie, chapitre 1 « Conception du laboratoire, fonctionnement
et sécurité », paragraphe 3) ;
- le port de gants stériles ;
'
- l'emploi de matériel à usage unique : ensemenceurs, étaleurs, pipettes...
1.3. Exemples d’ensemencement de micro-organismes
Afin d'illustrer et de préciser les techniques d’ensemencement et de culture
des micro-organismes, des exemples sont donnés avec des champignons (moisissures. levures) et des bactéries.
Pour la composition des milieux de culture utilisés : cf. première partie, chapitre 3, « Préparation et stérilisation du matériel et des milieux de culture », paragraphes 2.4 et 4.1.
1.3.1. Repiquage de champignons
L ensemencement se fait à l'aide du manche Pasteur avec fil de platine
recourbé à angle droit à quelques millimètres de l’extrémité (2 ou 3 mm).
Accrocher quelques filaments du mycélium de la moisissure dans le tube mère
d une moisissure et les déposer à la surface du milieu stérile d'un tube à ensemencer.
Ensemencer ainsi :
- un milieu a la carotte en tube de Roux avec Aspergillus niger (moisissure),
incuber une semaine à 25 °C environ et observer ;
( un tube de gélose au malt avec Rhizopus stolonifer var. stolonifer (exRhizopus nigricans. moisissure) ; incuber quelques jours à 25 °C et observer.
I our une levure (champignon) telle que Saccharomyces cerevisiae. prélever
un inoculum (a 1 anse de platine) et l'ensemencer en stries sur la pente d'une
gélose au malt en tube : incuber pendant 48 heures à 25 °C et observer le développement de cette levure en le comparant à celui des deux moisissures.