► Conseil pratique
En pratique courante, pour le travail de paillasse devant des becs de gaz, le
port de masque n'est pas pratiqué, le port de gants n’est pas conseillé et le port
de lunettes peut être conseillé (cf. recommandations du « Réseau ressource risque
biologique », http://3rb-bgb.com).
1.1.1.2. Seconde technique
Après les préparatifs cités dans la première méthode :
- prendre le tube contenant la culture mère dans la main gauche ; enlever le
bouchon en le tenant dans la main droite et flamber l’ouverture du tube ;
- prendre également le tube contenant le milieu de repiquage stérile dans la
main gauche, enlever le bouchon en le tenant dans la main gauche et flamber
l’ouverture du tube ;
- stériliser le fil de platine en le portant au rouge dans la flamme d’un bec
Bunsen, ainsi que la partie du porte-fil qui pénètre dans le tube, puis refroidir le
fil dans le tube stérile ;
- prélever un inoculum de la culture et le repiquer rapidement dans le tube à
ensemencer sans passer dans la flamme (rester toujours dans la zone stérile
autour du bec de gaz) ;
- repasser dans la flamme le fil à ensemencer en le portant au rouge (le fil de
platine est prêt à un nouvel ensemencement) ;
-
flamber l’ouverture des tubes et les reboucher.
Durant la réalisation de ces deux techniques, les ouvertures des tubes de culture ne doivent jamais quitter la zone stérile.
1.1.2. À l'aide de pipettes Pasteur stériles
Des pipettes Pasteur stériles, prêtes à l’emploi, sont utilisées dans tous les
laboratoires d’analyses microbiologiques (cf. première partie, chapitre 2
« Matériel principal du laboratoire de microbiologie », paragraphe 5).
/ .1.2.1. Pour les milieux liquides
Pour l’ensemencement de milieux liquides stériles en tubes, la technique
d'ensemencement se différencie des deux techniques précédentes par quelques
détails :
- la pipette est passée rapidement dans la flamme ;
- 1 ’effilure est cassée à la pince dans la zone stérile ;
- quelques gouttes de la culture sont prélevées dans le tube mère à 1 aide de la
pipette Pasteur, munie d’une poire de prélèvement ou autre système, et ensemencées dans le tube de culture.
Après utilisation, la pipette Pasteur est placée dans l'eau de javel à 12 °CI/L,
puis autoclavée.
En pratique courante, pour le travail de paillasse devant des becs de gaz, le
port de masque n'est pas pratiqué, le port de gants n’est pas conseillé et le port
de lunettes peut être conseillé (cf. recommandations du « Réseau ressource risque
biologique », http://3rb-bgb.com).
1.1.1.2. Seconde technique
Après les préparatifs cités dans la première méthode :
- prendre le tube contenant la culture mère dans la main gauche ; enlever le
bouchon en le tenant dans la main droite et flamber l’ouverture du tube ;
- prendre également le tube contenant le milieu de repiquage stérile dans la
main gauche, enlever le bouchon en le tenant dans la main gauche et flamber
l’ouverture du tube ;
- stériliser le fil de platine en le portant au rouge dans la flamme d’un bec
Bunsen, ainsi que la partie du porte-fil qui pénètre dans le tube, puis refroidir le
fil dans le tube stérile ;
- prélever un inoculum de la culture et le repiquer rapidement dans le tube à
ensemencer sans passer dans la flamme (rester toujours dans la zone stérile
autour du bec de gaz) ;
- repasser dans la flamme le fil à ensemencer en le portant au rouge (le fil de
platine est prêt à un nouvel ensemencement) ;
-
flamber l’ouverture des tubes et les reboucher.
Durant la réalisation de ces deux techniques, les ouvertures des tubes de culture ne doivent jamais quitter la zone stérile.
1.1.2. À l'aide de pipettes Pasteur stériles
Des pipettes Pasteur stériles, prêtes à l’emploi, sont utilisées dans tous les
laboratoires d’analyses microbiologiques (cf. première partie, chapitre 2
« Matériel principal du laboratoire de microbiologie », paragraphe 5).
/ .1.2.1. Pour les milieux liquides
Pour l’ensemencement de milieux liquides stériles en tubes, la technique
d'ensemencement se différencie des deux techniques précédentes par quelques
détails :
- la pipette est passée rapidement dans la flamme ;
- 1 ’effilure est cassée à la pince dans la zone stérile ;
- quelques gouttes de la culture sont prélevées dans le tube mère à 1 aide de la
pipette Pasteur, munie d’une poire de prélèvement ou autre système, et ensemencées dans le tube de culture.
Après utilisation, la pipette Pasteur est placée dans l'eau de javel à 12 °CI/L,
puis autoclavée.