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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Des « anses » dites d’inoculation en fil de platine calibrées (à 10 ou 100 pL
selon les besoins) sont toujours commercialisées ; elles peuvent être stérilisées
dans un stérilisateur électrique d’anses pendant 5 à 8 secondes à la température
de 600 °C.
Cependant, ces « anses » d’inoculation sont supplantées aujourd’hui dans les
laboratoires d'analyses microbiologiques par les ensemenceurs en plastique à
usage unique ou inoculateurs à anses calibrées à 1 pL ou 10 pL (suivant la terminologie employée dans les catalogues de matériel de microbiologie). Leur emploi
pour les ensemencements est d’ailleurs recommandé par la norme NF ISO 7218.
Deux techniques vont maintenant être décrites pour des ensemencements
autour d'un bec Bunsen, à l’aide d’une anse de platine calibrée ou non.
Ces techniques d’ensemencement sont traditionnelles et non normalisées,
mais il existe des variantes (pour des gauchers, inverser les protocoles décrits).
1.1.1.1. Première technique
Le protocole comprenant plusieurs étapes est exposé pour des tubes de cultures fermés avec des bouchons métalliques ou autres matériaux et éventuellement
fermés avec des bouchons en ouate de cellulose (mais il doit être accompagné
d'une démonstration) :
- nettoyer la paillasse autour du bec de gaz avec un tampon imbibé d’eau de
javel à 3 °C1/L ;
- se laver les mains et les avant-bras au savon, après avoir retroussé les manches de la blouse (cf. annexe générale 4 « Procédures de travail ») ;
— régler la Gamme du bec Bunsen (présence du cône bleu) ;
- prendre le tube contenant la culture mère dans la main gauche ; dévisser le
bouchon ou enlever le bouchon d’ouate en le bloquant avec l’auriculaire de la
main droite et flamber l’ouverture du tube ;
- stériliser le fil de platine en le portant au rouge dans la flamme d’un bec
Bunsen, ainsi que la partie du porte-fil qui pénètre dans les tubes et refroidir le
fil dans le tube stérile ;
— prélever un inoculum de la culture et reboucher le tube mère en le ramenant
sur le bouchon ; puis prendre le tube à ensemencer dans la main gauche et tenir
le bouchon avec 1 auriculaire pour le dévisser ou le retirer.
L inoculum doit impérativement rester dans la zone stérile du bec de gaz pendant le prélèvement et le changement de tube.
1 uis. selon les cas, repiquer dans le tube à ensemencer :
• par stries sur la pente du milieu de culture ;
par piqûre centrale dans la gélose en culot ;
par dispersion dans un bouillon de culture...
reboucher rapidement le tube ensemencé après avoir flambé l’ouverture et
repasser dans la flamme le fil à ensemencer en le portant au rouge (le fil de platine est alors prêt à un nouvel ensemencement).
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Des « anses » dites d’inoculation en fil de platine calibrées (à 10 ou 100 pL
selon les besoins) sont toujours commercialisées ; elles peuvent être stérilisées
dans un stérilisateur électrique d’anses pendant 5 à 8 secondes à la température
de 600 °C.
Cependant, ces « anses » d’inoculation sont supplantées aujourd’hui dans les
laboratoires d'analyses microbiologiques par les ensemenceurs en plastique à
usage unique ou inoculateurs à anses calibrées à 1 pL ou 10 pL (suivant la terminologie employée dans les catalogues de matériel de microbiologie). Leur emploi
pour les ensemencements est d’ailleurs recommandé par la norme NF ISO 7218.
Deux techniques vont maintenant être décrites pour des ensemencements
autour d'un bec Bunsen, à l’aide d’une anse de platine calibrée ou non.
Ces techniques d’ensemencement sont traditionnelles et non normalisées,
mais il existe des variantes (pour des gauchers, inverser les protocoles décrits).
1.1.1.1. Première technique
Le protocole comprenant plusieurs étapes est exposé pour des tubes de cultures fermés avec des bouchons métalliques ou autres matériaux et éventuellement
fermés avec des bouchons en ouate de cellulose (mais il doit être accompagné
d'une démonstration) :
- nettoyer la paillasse autour du bec de gaz avec un tampon imbibé d’eau de
javel à 3 °C1/L ;
- se laver les mains et les avant-bras au savon, après avoir retroussé les manches de la blouse (cf. annexe générale 4 « Procédures de travail ») ;
— régler la Gamme du bec Bunsen (présence du cône bleu) ;
- prendre le tube contenant la culture mère dans la main gauche ; dévisser le
bouchon ou enlever le bouchon d’ouate en le bloquant avec l’auriculaire de la
main droite et flamber l’ouverture du tube ;
- stériliser le fil de platine en le portant au rouge dans la flamme d’un bec
Bunsen, ainsi que la partie du porte-fil qui pénètre dans les tubes et refroidir le
fil dans le tube stérile ;
— prélever un inoculum de la culture et reboucher le tube mère en le ramenant
sur le bouchon ; puis prendre le tube à ensemencer dans la main gauche et tenir
le bouchon avec 1 auriculaire pour le dévisser ou le retirer.
L inoculum doit impérativement rester dans la zone stérile du bec de gaz pendant le prélèvement et le changement de tube.
1 uis. selon les cas, repiquer dans le tube à ensemencer :
• par stries sur la pente du milieu de culture ;
par piqûre centrale dans la gélose en culot ;
par dispersion dans un bouillon de culture...
reboucher rapidement le tube ensemencé après avoir flambé l’ouverture et
repasser dans la flamme le fil à ensemencer en le portant au rouge (le fil de platine est alors prêt à un nouvel ensemencement).