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Méthodes de travail
en microbiologie
1.
Techniques d’ensemencement des micro-organismes
Le travail d’ensemencement des micro-organismes se pratique soit sur une
paillasse conforme à la réglementation (cf. première partie, chapitre 1,
« Conception du laboratoire, fonctionnement et sécurité », paragraphe 1 ) autour
d'un bec Bunsen de sécurité (bec de gaz) ou d’un bec électrique, soit sous un
poste microbiologique de sécurité (PSM) (cf. première partie, chapitre 2,
« Matériel principal du laboratoire de microbiologie », paragraphes 2.1. et 2.2.).
1.1.
Travail sur paillasse avec des becs Bunsen de sécurité
Autour de la flamme d’un bec Bunsen existe une « zone stérile ». C’est seulement dans cette zone que pourront être débouchés les tubes contenant des
milieux de culture stérilisés ou les tubes contenant les cultures mères de microorganismes ; tout autre instrument devant rester stérile sera également maintenu
dans cette zone.
Les ensemencements de tubes de cultures peuvent être réalisés suivant deux
techniques principales qui utilisent comme instruments le manche Pasteur avec
fil de platine, la pipette Pasteur stérile ou les ensemenceurs à usage unique.
1.1.1. À l'aide des ensemenceurs ou inoculateurs
Le manche Pasteur avec fil de platine (encore appelé « fil à ensemencer » ou
« ensemenceur métallique ») a été l'instrument du microbiologiste depuis plus
d'un siècle, le platine ayant d’ailleurs été remplacé, pendant des décennies, par
l'alliage nickel chrome, moins onéreux ; actuellement, ces « fils » sont à nouveau
en platine et parfois en inox.
Le fil de platine étant utilisé le plus souvent avec une petite boucle à son extrémité. le manche Pasteur avec fil de platine est alors désigné simplement « anse »
ou « anse de platine » ou ose (en allemand). On repique ou on ensemence ce qui
est retenu dans la boucle (on dit « repiquer une anse »). Il peut aussi être utilisé
droit (sans la boucle).
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