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Figure 6.2. Résultat de séquençage par la méthode de Sanger
6.2. Automatisation du séquençage
Le séquençage est de plus en plus automatisé. Le principe reste le même mais le marquage et
le mode de détection sont différents. Ce sont les ddNTP qui sont marqués avec un
fluorochrome. Chaque ddNTP porte un fluorochrome qui émet dans une gamme de longueur
d'onde différente de celle des autres. Il est donc possible de repérer individuellement les
quatre types de marquages dans un mélange. On mélange comme précédemment l'ADN
matrice, l'amorce, les dNTP, la polymérase et dans le même tube les quatre ddNTP marqués.
Il n'y a qu'un tube dont le contenu est soumis à l’électrophorèse. Au bout du gel 4 capteurs (un
par longueur d'onde différente) enregistrent la lumière émise par les molécules terminées par
un ddNTP. Ces quatre graphes sont superposés et un logiciel traduit ce pictogramme en
séquence.