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Figure 6.3. Résultat de séquençage par la méthode de sanger automatisée
6.3. Le pyroséquençage
Basé sur un principe de séquençage par synthèse, par opposition au séquençage par
«terminaison » (méthode Sanger). C’est le séquençage d’un ADN monobrin par synthèse du
brin complémentaire, base par base, en détectant à chaque étape l’activité de la polymérase
par une autre enzyme chimiluminescente : la luciférase.
Les Nucléotides (dNTP) sont ajoutés les uns après les autres :
Si c’est le bon nucléotide : incorporation et libération d’un pyrophosphate (PPi) qui sera
transformé en ATP. L’ATP apporte l’énergie nécessaire à la réaction de conversion de la
luciférine par la luciférase. Cette réaction génère de la lumière visible dont l’intensité est
proportionnelle à la quantité d’ATP.
Une Apyrase est ajoutée afin de dégrader les nucléotides en surplus