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μo : La mobilité de la molécule en milieu liquide
C: Concentration du gel
Kr: Coefficient de retardement dû au gel
Il existe deux matrices de gel utilisées pour l’électrophorèse. La vitesse de migration des
molécules à travers les mailles de ces gels dépend de la masse moléculaire et de la
concentration du gel.
Le gel utilisé est soit l’agarose (fragment jusqu’à 20-25 kb) ou le polyacrylamide (petites
tailles <1000pb) (%M/V). L'augmentation de la concentration d'agarose dans un gel réduit la
vitesse de migration et permet la séparation de fragment d'ADN de plus petite taille.
Le tampon utilisé: TBE tris borate EDTA, TAE tris citrate EDTA……
L’échantillon déposé dans le puits est mélangé avec un bleu de dépôt (bleu de méthylène) qui
a pour rôle de déterminer le front de migration
La détermination précise des tailles des fragments séparés par électrophorèse est effectuée en
faisant migrer des marqueurs de poids moléculaire en parallèle avec les échantillons à
analyser. Une relation inversement proportionnelle est observée entre le Log PM et la distance
parcourue dans le gel.
Figure 3.1. Electrophorèse des acides nucléiques
La méthode de révélation des acides nucléiques la plus utilisée est la révélation au bromure
d'éthidium (ou BET) qui est un agent intercalant entre les bases de l’ADN. Sous UV, il