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Chapitre 3. Préparation des acides nucléiques:
Extraction/Purification
Les acides nucléiques peuvent être extraits à partir de tous matériels biologiques contenant un
noyau (exception des hématies). Cependant la qualité et la quantité est différente d’un organe
à un autre. Dans la pratique, les acides nucléiques sont souvent extraits du sang total. Le
procédé classique est l’extraction par le couple phénol-chloroforme.
• Le phénol est un excellent agent dénaturant des protéines et il permet de séparer
efficacement les protéines (soluble dans le phénol) et les acides nucléiques (solubles
dans la phase aqueuse).
• Le phénol est ensuite éliminé par l’extraction avec du chloroforme.
• La phase aqueuse contient les acides nucléiques.
• Des traitements par des agents clivant les protéines (proteinase K) peuvent être
nécessaires surtout pour la digestion des protéines associées à l’ADN.
• Des traitements par des ARNases sont également effectués pour éliminer les ARN.
Précipitation de l’ADN : les acides nucléiques peuvent être récupérés sous forme
solide à la suite de précipitation par l’alcool éthylique en présence de force ionique ou
par l’alcool isopropylique.
De nombreux réactifs sont disponibles, prêts à l’emploi (Kit d’extraction), ce qui
permet de simplifier les opérations de purification.
3.1. Extraction d’ADN à partir du sang ou d’un tissu
• A partir du sang : il faut faire éclater les globules rouges du sang par choc osmotique en le
mélangeant à une solution hypotonique et récupérer des globules blancs par centrifugation.
• A partir des tissus : il faut faire un broyage dans une presse à tissus, suivie d’une
homogénéisation dans un tube de Potter.
L’homogénat qu’on obtient est un mélange de débris de membranes (microsomes), de
nombreuses particules subcellulaires (noyaux, mitochondries) et de molécules en solution
(cytoplasme).
Chapitre 3. Préparation des acides nucléiques:
Extraction/Purification
Les acides nucléiques peuvent être extraits à partir de tous matériels biologiques contenant un
noyau (exception des hématies). Cependant la qualité et la quantité est différente d’un organe
à un autre. Dans la pratique, les acides nucléiques sont souvent extraits du sang total. Le
procédé classique est l’extraction par le couple phénol-chloroforme.
• Le phénol est un excellent agent dénaturant des protéines et il permet de séparer
efficacement les protéines (soluble dans le phénol) et les acides nucléiques (solubles
dans la phase aqueuse).
• Le phénol est ensuite éliminé par l’extraction avec du chloroforme.
• La phase aqueuse contient les acides nucléiques.
• Des traitements par des agents clivant les protéines (proteinase K) peuvent être
nécessaires surtout pour la digestion des protéines associées à l’ADN.
• Des traitements par des ARNases sont également effectués pour éliminer les ARN.
Précipitation de l’ADN : les acides nucléiques peuvent être récupérés sous forme
solide à la suite de précipitation par l’alcool éthylique en présence de force ionique ou
par l’alcool isopropylique.
De nombreux réactifs sont disponibles, prêts à l’emploi (Kit d’extraction), ce qui
permet de simplifier les opérations de purification.
3.1. Extraction d’ADN à partir du sang ou d’un tissu
• A partir du sang : il faut faire éclater les globules rouges du sang par choc osmotique en le
mélangeant à une solution hypotonique et récupérer des globules blancs par centrifugation.
• A partir des tissus : il faut faire un broyage dans une presse à tissus, suivie d’une
homogénéisation dans un tube de Potter.
L’homogénat qu’on obtient est un mélange de débris de membranes (microsomes), de
nombreuses particules subcellulaires (noyaux, mitochondries) et de molécules en solution
(cytoplasme).