Marine lipids
Purification et caractérisation
de la phosphatidylcholine de la microalgue
Porphyridium cruentum par couplage
chromatographique de partage centrifuge
(CPC) et chromatographie couche mince
avec formateur de gradient (HPTLC-AMD)
Gwenaël Baudimant (1) , Jean-Paul Gouygou (2) , Patrick Durand (2)
(D Aquaartis, ZI, 29 rue de la Dutee, 44806 Saint-Herblain Cedex, trance
info@aquaartis.com
(2) Ifremer Nantes, Drv/vp/bm, BP 21105, 44311 Nantes Cedex 03, France
La chromatographie de partage centrifruge (CPC) est une méthode de
chromatographie liquide-liquide sans support solide, utilisant deux
liquides non miscibles préparés par un mélange de plusieurs solvants
ou solutions. L’une des phases liquides, dite stationnaire, est maintenue dans l’appareil grâce à un champ de forces centrifuges alors que l’autre
est mobile et percole à travers la colonne. Ancienne par son principe et
par certaines réalisations techniques, tel l’appareil de Graig, la CPC
connaît une évolution rapide depuis une vingtaine d’années, dans la
recherche de technologies, qui assurent un mécanisme de partage des
solutés efficace, une automatisation du transfert entre les phases et, par
là même, une diminution de la durée des séparations.
Les applications de cette technologie concernent la séparation des métabolites secondaires comme les hétérosides (flavonoïdes, saponosides,
glucosides cardiotoniques), les phénols (tanins, acides phénoliques),
les alcaloïdes (indoliques) ou les terpènes (rétinoïdes sesquiterpènes).
Des travaux ont également porté sur la purification de métabolites primaires comme les acides gras, les acides aminés ou les peptides.
Nous présentons ici les résultats d’une séparation par CPC de phosphatidylcholine (PC) provenant d’un extrait de phospholipides totaux
de la microalgue marine Porphyridium cruentum. Cette algue rouge,
appartenant à la classe des rhodophycées, a la particularité de synthétiser de forts taux d’acide arachidonique 20:4 (n-6), jusqu’à 55 % des
acides gras. Cet acide gras se retrouve essentiellement associé aux phospholipides et notamment à la PC. L’appareil utilisé est un chromatographe de type Kromaton 111 développé par la société SEAB (Villejuif,
France). Il s’agit d’un appareil fonctionnant en mode hydrostatique, muni
de 4 bobines, offrant ainsi une version analytique (200 ml), une version préparative (de 400 ml à 1 l) et une version production (de 2 l à
2,4 litres). Le système de solvants heptane-acétate d ethyle-acétonitrile
a été assemblé et caractérisé pour la séparation de la PC. Un de ces
mélanges a été sélectionné et nous sommes parvenus à purifier la phosphatidylcholine d’un extrait complexe.
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Purification et caractérisation
de la phosphatidylcholine de la microalgue
Porphyridium cruentum par couplage
chromatographique de partage centrifuge
(CPC) et chromatographie couche mince
avec formateur de gradient (HPTLC-AMD)
Gwenaël Baudimant (1) , Jean-Paul Gouygou (2) , Patrick Durand (2)
(D Aquaartis, ZI, 29 rue de la Dutee, 44806 Saint-Herblain Cedex, trance
info@aquaartis.com
(2) Ifremer Nantes, Drv/vp/bm, BP 21105, 44311 Nantes Cedex 03, France
La chromatographie de partage centrifruge (CPC) est une méthode de
chromatographie liquide-liquide sans support solide, utilisant deux
liquides non miscibles préparés par un mélange de plusieurs solvants
ou solutions. L’une des phases liquides, dite stationnaire, est maintenue dans l’appareil grâce à un champ de forces centrifuges alors que l’autre
est mobile et percole à travers la colonne. Ancienne par son principe et
par certaines réalisations techniques, tel l’appareil de Graig, la CPC
connaît une évolution rapide depuis une vingtaine d’années, dans la
recherche de technologies, qui assurent un mécanisme de partage des
solutés efficace, une automatisation du transfert entre les phases et, par
là même, une diminution de la durée des séparations.
Les applications de cette technologie concernent la séparation des métabolites secondaires comme les hétérosides (flavonoïdes, saponosides,
glucosides cardiotoniques), les phénols (tanins, acides phénoliques),
les alcaloïdes (indoliques) ou les terpènes (rétinoïdes sesquiterpènes).
Des travaux ont également porté sur la purification de métabolites primaires comme les acides gras, les acides aminés ou les peptides.
Nous présentons ici les résultats d’une séparation par CPC de phosphatidylcholine (PC) provenant d’un extrait de phospholipides totaux
de la microalgue marine Porphyridium cruentum. Cette algue rouge,
appartenant à la classe des rhodophycées, a la particularité de synthétiser de forts taux d’acide arachidonique 20:4 (n-6), jusqu’à 55 % des
acides gras. Cet acide gras se retrouve essentiellement associé aux phospholipides et notamment à la PC. L’appareil utilisé est un chromatographe de type Kromaton 111 développé par la société SEAB (Villejuif,
France). Il s’agit d’un appareil fonctionnant en mode hydrostatique, muni
de 4 bobines, offrant ainsi une version analytique (200 ml), une version préparative (de 400 ml à 1 l) et une version production (de 2 l à
2,4 litres). Le système de solvants heptane-acétate d ethyle-acétonitrile
a été assemblé et caractérisé pour la séparation de la PC. Un de ces
mélanges a été sélectionné et nous sommes parvenus à purifier la phosphatidylcholine d’un extrait complexe.
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