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Efflorescences toxiques des eaux côtières françaises :écologie, écophysiologie, toxicologie
Il n' a pas été observé de mortali té précoce des
lapins par effet toxique des gonyautoxines. Deux
lapins sur quatre ont dû être sacrifiés au cours de
l' expérimentation par suite de blessures importan tes aux pattes. La production d'anticorps a été
maintenue deux ans sur les deux lapins restants,
elle est arrêtée depuis décembre 1994 par décès
des animaux.
Les anticorps produits montrent des titres élevés en
ElA indirect pour l' antigène STX-PLL fi xé. Par
ailleurs, bien que l' immunogéne utilisé pour les
immunisations soit le complexe GTX2/GTX3, les
anticorps produits montrent une très haute spécificité pour la saxitoxine mais réagissent aussi avec
les GTX2/GTX3 . La limite de détection observée
est de l'ordre de 1 et 50 pg/ml de solution de saxitoxine et de GTX2/GTX3, respectivement (fig. 9).
Les anticorps polyclonaux de lapins obtenus peuvent être de bons outils pour le dépistage. Il serait
bon de les utiliser pour tester des coquillages naturellement contaminés et de comparer ces résultats
à ceux obtenus par analyse CLHP.
- Immunisation des souris
Six souri s Balb/c âgées de six semaines ont été
immunisées dès le second semestre 1994 à des
doses allant de 1 ~g à 2 ~g de GTX2/GTX3 selon
les souris (DL 50 en STX == 60 ng à 100 ng/souris),
comme précédemment décrit.
Les rappels ont été effectués avec des doses croi ssantes allant jusqu'à 8 ~g de GTX2/GTX3/souris. Il
a été observé une diminution de mortalité des souris par rapport au modèle saxitox ine. En effet, 1 0
mois après le début d' immuni sation, 50 % des animaux sont toujours vivants et en cours d' immunisation prolongée.
Par contre, par rapport à l' espèce lapin le titre des
anticorps présents dans le sang circulant des souri s n'est pas très élevé pour l' antigène STX-P LL.
De plus on observe une affinité et une spécificité
des anticorps pratiquement nulles pour les
GTX2/GTX3, et très faibles pour la STX, bien que
les animaux soient régulièrement rappelés.
L' immunisation sera poursuivie tant que les souris
survivront dans l'espoir d' observer dans leur sang
c irculant des anticorps spécifiques et de bonne
affinité, pour envisager l' utilisation de leurs lymphocytes pour les expérimentations de fusion cellulaire et de production d'anticorps monoclonaux.
lnhibileurs: STX et GTX2/GTX3
0 .0
2.0 r--------------------------.
1.5
1.0
........
.. . ···
0.5
100
.. .
10
··'
.... ···
.. ···
... ··
.. .
.. · ·
.. •···
• •
.. ··
01
001
0.001
Inhibiteur en ng/ ml
0.0001
0.00001
Figure 9 - Courbes d'inhibition de l'anticorps de lapin immunisé avec GTX2/GTX3-KLH.
- - STX
··À ·· GTX2/GTX3
Efflorescences toxiques des eaux côtières françaises :écologie, écophysiologie, toxicologie
Il n' a pas été observé de mortali té précoce des
lapins par effet toxique des gonyautoxines. Deux
lapins sur quatre ont dû être sacrifiés au cours de
l' expérimentation par suite de blessures importan tes aux pattes. La production d'anticorps a été
maintenue deux ans sur les deux lapins restants,
elle est arrêtée depuis décembre 1994 par décès
des animaux.
Les anticorps produits montrent des titres élevés en
ElA indirect pour l' antigène STX-PLL fi xé. Par
ailleurs, bien que l' immunogéne utilisé pour les
immunisations soit le complexe GTX2/GTX3, les
anticorps produits montrent une très haute spécificité pour la saxitoxine mais réagissent aussi avec
les GTX2/GTX3 . La limite de détection observée
est de l'ordre de 1 et 50 pg/ml de solution de saxitoxine et de GTX2/GTX3, respectivement (fig. 9).
Les anticorps polyclonaux de lapins obtenus peuvent être de bons outils pour le dépistage. Il serait
bon de les utiliser pour tester des coquillages naturellement contaminés et de comparer ces résultats
à ceux obtenus par analyse CLHP.
- Immunisation des souris
Six souri s Balb/c âgées de six semaines ont été
immunisées dès le second semestre 1994 à des
doses allant de 1 ~g à 2 ~g de GTX2/GTX3 selon
les souris (DL 50 en STX == 60 ng à 100 ng/souris),
comme précédemment décrit.
Les rappels ont été effectués avec des doses croi ssantes allant jusqu'à 8 ~g de GTX2/GTX3/souris. Il
a été observé une diminution de mortalité des souris par rapport au modèle saxitox ine. En effet, 1 0
mois après le début d' immuni sation, 50 % des animaux sont toujours vivants et en cours d' immunisation prolongée.
Par contre, par rapport à l' espèce lapin le titre des
anticorps présents dans le sang circulant des souri s n'est pas très élevé pour l' antigène STX-P LL.
De plus on observe une affinité et une spécificité
des anticorps pratiquement nulles pour les
GTX2/GTX3, et très faibles pour la STX, bien que
les animaux soient régulièrement rappelés.
L' immunisation sera poursuivie tant que les souris
survivront dans l'espoir d' observer dans leur sang
c irculant des anticorps spécifiques et de bonne
affinité, pour envisager l' utilisation de leurs lymphocytes pour les expérimentations de fusion cellulaire et de production d'anticorps monoclonaux.
lnhibileurs: STX et GTX2/GTX3
0 .0
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1.5
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Inhibiteur en ng/ ml
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Figure 9 - Courbes d'inhibition de l'anticorps de lapin immunisé avec GTX2/GTX3-KLH.
- - STX
··À ·· GTX2/GTX3