Les résultats montrent que seuls les animaux
immunisés avec le conjugué STX-KLH présentent
des anticorps spécifiques anti saxitoxine. Les anticorps polyclonaux de lapins obtenus présentent
une haute affinité pour la sax itox ine et montrent
des réaction s croisées avec les GTX2/GTX3 et la
decarbamoyl-saxitoxine, à des niveaux de 5 pg/ml
et de 5 ng/ml pour la saxitoxine et les gonyautoxines en solution respectivement (fig. 8, p. 130).
Les premiers essa is entrepris sur des extraits de
coqui llage sont très encourageants, et sont à
conforter par d' autres confirmations (Tabl. 5).
Les différentes techniques utilisées (telles que le
système Avid ine-biotine, l'ElA direct) pour optimiser la sensibilité du test n'ont pas été satisfaisan tes.
Parmi les sou ri s immun isées avec le conjugué
STX-KLH, une seule présentait des anticorps spécifiques de la saxitoxine. La limite de détection des
anticorps était d'environ 150 pg/ml de saxitoxine.
Malheureusement en raison de la mort prématurée de la souris présentant des anticorps spécifiqu es anti-saxitoxine, auc une fusion cellul aire
n'a pu être réalisée.
Chimie analytique
Expérimentations GTX2/GTX3
• Préparation des conjugués GTX2/GTX3 - porteurs
Après épi mérisation du complexe purifié, 15 jours
à 3 semaines à 37 oc deux couplages sont effectués comme précédemment décrits, un congugué
GTX2/GTX3-KLH et un conjugué GTX2/GTX3PLL, puis les rendements de couplage sont vérifiés
comme pour le modèle sax itoxine.
• Immunisation des animaux
Celle-ci a été réalisée dans un premier temps sur
les lapin s, puis après observation de l'espèce
lapin, sur l' espèce souris dans le but d'obtenir
des anticorps monoclonaux.
- Immunisation des lapins
Quatre lapins « germ-free » ont été immunisés en
parallèle selon les protocoles classiques, immunisation en présence d' adj uvant complet de
Freund et rappel s en présence d'adjuvant incomplet. D es doses croissantes allant de 30 ~ g à
125 ~g de GTX2/GTX3 ont été injectées selon la
période d' immunisation ou de rappel.
Toxines paralysantes (GTX/STX)
• 82
*4
• 1
*3
* 2
*NeO • dcSTX
• STX • Tox.Tot 6 ElA
Eq/100 g Eq/100 g
Mo77
66
66
55
Mo IF 8.2
10,4
10
4,2
4,1
14,2
42,9
5
108 C2
5,6
0,5
1,4
:::::2
""9, 15
6
108 N2
0,47
0,8
:::::2
:::::3,4
2,5
54 Cl
4,9
11 ,8
5
12,1
6,6
40,4
10
54 N1
0,6
5,2
10,2
5,3
10,6
7,5
39,4
7
108 Cl
3,8
0,6
1,3
:::::2
""7,9
2,6
108 N1
0,6
1,1
:::::2
""3,7
2,5
80 N2
4,9
3,4
7
6,7
22
6,5
Tableau 5: Dosage ElA d 'extraits de coquillages avec l'anticorps de lapin anti-STX (6) comparé au dosage CLHP (•) (teneurs en 11g
Equiv. STX/1 00 g de c hair).
131
immunisés avec le conjugué STX-KLH présentent
des anticorps spécifiques anti saxitoxine. Les anticorps polyclonaux de lapins obtenus présentent
une haute affinité pour la sax itox ine et montrent
des réaction s croisées avec les GTX2/GTX3 et la
decarbamoyl-saxitoxine, à des niveaux de 5 pg/ml
et de 5 ng/ml pour la saxitoxine et les gonyautoxines en solution respectivement (fig. 8, p. 130).
Les premiers essa is entrepris sur des extraits de
coqui llage sont très encourageants, et sont à
conforter par d' autres confirmations (Tabl. 5).
Les différentes techniques utilisées (telles que le
système Avid ine-biotine, l'ElA direct) pour optimiser la sensibilité du test n'ont pas été satisfaisan tes.
Parmi les sou ri s immun isées avec le conjugué
STX-KLH, une seule présentait des anticorps spécifiques de la saxitoxine. La limite de détection des
anticorps était d'environ 150 pg/ml de saxitoxine.
Malheureusement en raison de la mort prématurée de la souris présentant des anticorps spécifiqu es anti-saxitoxine, auc une fusion cellul aire
n'a pu être réalisée.
Chimie analytique
Expérimentations GTX2/GTX3
• Préparation des conjugués GTX2/GTX3 - porteurs
Après épi mérisation du complexe purifié, 15 jours
à 3 semaines à 37 oc deux couplages sont effectués comme précédemment décrits, un congugué
GTX2/GTX3-KLH et un conjugué GTX2/GTX3PLL, puis les rendements de couplage sont vérifiés
comme pour le modèle sax itoxine.
• Immunisation des animaux
Celle-ci a été réalisée dans un premier temps sur
les lapin s, puis après observation de l'espèce
lapin, sur l' espèce souris dans le but d'obtenir
des anticorps monoclonaux.
- Immunisation des lapins
Quatre lapins « germ-free » ont été immunisés en
parallèle selon les protocoles classiques, immunisation en présence d' adj uvant complet de
Freund et rappel s en présence d'adjuvant incomplet. D es doses croissantes allant de 30 ~ g à
125 ~g de GTX2/GTX3 ont été injectées selon la
période d' immunisation ou de rappel.
Toxines paralysantes (GTX/STX)
• 82
*4
• 1
*3
* 2
*NeO • dcSTX
• STX • Tox.Tot 6 ElA
Eq/100 g Eq/100 g
Mo77
66
66
55
Mo IF 8.2
10,4
10
4,2
4,1
14,2
42,9
5
108 C2
5,6
0,5
1,4
:::::2
""9, 15
6
108 N2
0,47
0,8
:::::2
:::::3,4
2,5
54 Cl
4,9
11 ,8
5
12,1
6,6
40,4
10
54 N1
0,6
5,2
10,2
5,3
10,6
7,5
39,4
7
108 Cl
3,8
0,6
1,3
:::::2
""7,9
2,6
108 N1
0,6
1,1
:::::2
""3,7
2,5
80 N2
4,9
3,4
7
6,7
22
6,5
Tableau 5: Dosage ElA d 'extraits de coquillages avec l'anticorps de lapin anti-STX (6) comparé au dosage CLHP (•) (teneurs en 11g
Equiv. STX/1 00 g de c hair).
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