ing >> avec les fibroblastes BHK21 /C 13), ces perturbations pouvant résulter de ses effets sur le calc ium et éventuel lement I' IP3 (Diogène et al.,
1994).
Ses effets sur le calcium cellulaire varient en fonction des phases du cycle cellu laire. Les stades critiques semb lent être l' induction de l' entrée en
phase" S >> et, à moindre degré, l'entrée en mitose
(Berreur-Bonnenfant et al., 1994).
Le test au rouge neutre, avec en parallèle une
observation des cellules, permet d'estimer la toxicité d'extraits d'algues.
Ici, les fibroblastes sont incubés 3 heures dans des
doses croissantes de MTX avec quatre repliquats
0 .4
•
0.3
0
0.2
-.::t
LI")
0
0 .1
D
0
-0.1
-0.70
-0.48
•
-0.26
Tesrs biologiques
par dose et observés régulièrement. Puis ils sont
exposés 3 heures au rouge neutre, délai au bout
duquel on mesure la densité optique (DO 540). À
partir de la courbe donnant la DO en fonction du
logarithme de la dose on déduit la concentration
(Cl 50) inhibant 50% de l'assimilation (fig. 2).
Pour suivre les différentes étapes de purification
d' un extrait algal ce test a été comparé au test souris avec lequel on détermine une dose minimale
léta le (DLM). L' augmentation d' activité révélée
par le test souris a été confi rmée par le test au
rouge neutre et les auteurs ont observé une relation linéaire entre Cl 50 et log (DLM) (fig. 3).
•
- 0 .04
0.18
log (concentration MTX)
Figure 2 - Toxicité de l'extrait (C-18CLHP, 0 ) de manotoxine (MTX) sur les fibroblastes 8HK 21/C13 déterminée par le test au rouge
neutre. Les cellules sont exposées pendant 3 heures à des doses croissantes de l'extrait MTX (4 repliquats/dose). Le milieu de culture est ensuite évacué, les cellules sont rincées avec un tampon phosphate salé et exposées 3 heures au milieu contenant Je rouge
neutre. Les cellules sont ensuite fixées (solution formol/calcium) et extraites (solution acide acétique/éthanol). L'abondance à
540 nm (00 540 ) est reportée en fonction du log de la concentration en MTX (US/ml; US= unité souris ou quantité d'extrait nécessaire pour tuer une souris de 20 g en 24 heures). La C/ 50 est déterminée par la courbe y = (A-0)/ [1 + (x/c) 8 ] + 0 où A= 0,39 ;
8 = 5,73; C = 0,98 ; 0 =-0,02 ; r = 0,92. DO control= 0,414.
~
.....J
e
00
0
.....J
0.5~
0 ~----------------,_--~~~---A ____ _
/v~
-1.5 = /D
- 2.0 1
-0.5 -
-1.0 -
-2.5
~·E
1
1
1
1
-2.0 -1.5 -1.0 -0 .5
0
0.5
1.0
1.5
log (Ds4oCiso)
Figure 3 - Relation entre la toxicité cellulaire {log (Ds4oCiso) obtenu par le test au rouge neutre] et la toxicité sur souris (log DLM)
de cinq extraits de MTX de degré cro issant de pureté (A, 8, C, 0 etE). Une corrélation positive est observée entre les deux tests. La
droite de régression est y= 1,035 x - 0,526 (r 2 = 0, 994).
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1994).
Ses effets sur le calcium cellulaire varient en fonction des phases du cycle cellu laire. Les stades critiques semb lent être l' induction de l' entrée en
phase" S >> et, à moindre degré, l'entrée en mitose
(Berreur-Bonnenfant et al., 1994).
Le test au rouge neutre, avec en parallèle une
observation des cellules, permet d'estimer la toxicité d'extraits d'algues.
Ici, les fibroblastes sont incubés 3 heures dans des
doses croissantes de MTX avec quatre repliquats
0 .4
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0
0 .1
D
0
-0.1
-0.70
-0.48
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-0.26
Tesrs biologiques
par dose et observés régulièrement. Puis ils sont
exposés 3 heures au rouge neutre, délai au bout
duquel on mesure la densité optique (DO 540). À
partir de la courbe donnant la DO en fonction du
logarithme de la dose on déduit la concentration
(Cl 50) inhibant 50% de l'assimilation (fig. 2).
Pour suivre les différentes étapes de purification
d' un extrait algal ce test a été comparé au test souris avec lequel on détermine une dose minimale
léta le (DLM). L' augmentation d' activité révélée
par le test souris a été confi rmée par le test au
rouge neutre et les auteurs ont observé une relation linéaire entre Cl 50 et log (DLM) (fig. 3).
•
- 0 .04
0.18
log (concentration MTX)
Figure 2 - Toxicité de l'extrait (C-18CLHP, 0 ) de manotoxine (MTX) sur les fibroblastes 8HK 21/C13 déterminée par le test au rouge
neutre. Les cellules sont exposées pendant 3 heures à des doses croissantes de l'extrait MTX (4 repliquats/dose). Le milieu de culture est ensuite évacué, les cellules sont rincées avec un tampon phosphate salé et exposées 3 heures au milieu contenant Je rouge
neutre. Les cellules sont ensuite fixées (solution formol/calcium) et extraites (solution acide acétique/éthanol). L'abondance à
540 nm (00 540 ) est reportée en fonction du log de la concentration en MTX (US/ml; US= unité souris ou quantité d'extrait nécessaire pour tuer une souris de 20 g en 24 heures). La C/ 50 est déterminée par la courbe y = (A-0)/ [1 + (x/c) 8 ] + 0 où A= 0,39 ;
8 = 5,73; C = 0,98 ; 0 =-0,02 ; r = 0,92. DO control= 0,414.
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1.0
1.5
log (Ds4oCiso)
Figure 3 - Relation entre la toxicité cellulaire {log (Ds4oCiso) obtenu par le test au rouge neutre] et la toxicité sur souris (log DLM)
de cinq extraits de MTX de degré cro issant de pureté (A, 8, C, 0 etE). Une corrélation positive est observée entre les deux tests. La
droite de régression est y= 1,035 x - 0,526 (r 2 = 0, 994).
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