Chapitre II : Matériel et méthodes
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4.2.4.2. Mode opératoire
L’ensemencement se fait en tubes.
- Mettre dans des tubes à essai 1 ml de chaque dilution (solutions mères et filles) et le témoin
(contenant le solvant stérile ayant servi à la dilution des échantillons)
- Chauffer au bain marie à 80°C pendant 10 minutes, puis refroidir brutalement sous l’eau
de robinet (choc thermique pour éliminer les formes végétatives qui n’ont pas la capacité de
sporuler).
- Ajouter 20ml de gélose viande-foie additionnée de sulfite de sodium et d’alun de fer, puis
bien agiter les tubes fermés.
- Incuber à 37°C durant 24 heures.
4.2.4.3. Lecture et dénombrement
Les sulfito-réducteurs se développent sous forme de grosses colonies noires dues à la
réduction des sulfites, qui précipitent avec les ions de fer, chaque colonie noire est issue
d'une spore qui aura germé.
4.2.5. Recherche et dénombrement des Staphylococcus aureus
4.2.5.1. Définition
Staphylococcus aureus est, comme tous les staphylocoques, une bactérie sous forme cocci à
Gram positif, de 1μm de diamètre environ, apparaissant en amas à l'examen microscopique.
Elle est immobile, non sporulée et ne présente pas de capsule visible au microscope optique
(Marjorie, 1987).
4.2.5.2. Mode opératoire
L’ensemencement se fait en surface.
- Ajouter 0,1ml de chaque dilution dans une boite de Pétri contenant déjà la gélose Baird
Parker fondue et ramenée à 47°C, le jaune d'œuf et du tellurite de Potassium.
- On étale sur toute la surface à l'aide d'un râteau.
- incuber à 37°C pendant 48 heures.
4.2.5.3. Lecture et dénombrement
Les colonies de Staphylococcus aureus prises en compte sont celles qui donnent des colonies
noires (réduction du tellurite en tellure) avec un halo clair dû à la protéolyse des protéines
du jaune d'œuf, et éventuellement, un liseré blanc, opaque (précipitation des acides gras
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4.2.4.2. Mode opératoire
L’ensemencement se fait en tubes.
- Mettre dans des tubes à essai 1 ml de chaque dilution (solutions mères et filles) et le témoin
(contenant le solvant stérile ayant servi à la dilution des échantillons)
- Chauffer au bain marie à 80°C pendant 10 minutes, puis refroidir brutalement sous l’eau
de robinet (choc thermique pour éliminer les formes végétatives qui n’ont pas la capacité de
sporuler).
- Ajouter 20ml de gélose viande-foie additionnée de sulfite de sodium et d’alun de fer, puis
bien agiter les tubes fermés.
- Incuber à 37°C durant 24 heures.
4.2.4.3. Lecture et dénombrement
Les sulfito-réducteurs se développent sous forme de grosses colonies noires dues à la
réduction des sulfites, qui précipitent avec les ions de fer, chaque colonie noire est issue
d'une spore qui aura germé.
4.2.5. Recherche et dénombrement des Staphylococcus aureus
4.2.5.1. Définition
Staphylococcus aureus est, comme tous les staphylocoques, une bactérie sous forme cocci à
Gram positif, de 1μm de diamètre environ, apparaissant en amas à l'examen microscopique.
Elle est immobile, non sporulée et ne présente pas de capsule visible au microscope optique
(Marjorie, 1987).
4.2.5.2. Mode opératoire
L’ensemencement se fait en surface.
- Ajouter 0,1ml de chaque dilution dans une boite de Pétri contenant déjà la gélose Baird
Parker fondue et ramenée à 47°C, le jaune d'œuf et du tellurite de Potassium.
- On étale sur toute la surface à l'aide d'un râteau.
- incuber à 37°C pendant 48 heures.
4.2.5.3. Lecture et dénombrement
Les colonies de Staphylococcus aureus prises en compte sont celles qui donnent des colonies
noires (réduction du tellurite en tellure) avec un halo clair dû à la protéolyse des protéines
du jaune d'œuf, et éventuellement, un liseré blanc, opaque (précipitation des acides gras