Chapitre III : MATERIEL ET METHODES
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 Verser l’échantillon dans la burette ;
 Ajouter les 20 ml d’Hexane ;
 Récupérer dans un tube à essai, propre et étiqueté, le contenu de la burette en laissant
toujours 1 ml pour garder la colonne humide. Soit F 1 cette fraction ;
 Mesurer sous la hotte 20 ml du mélange Hexane / Dichlorométane (proportions : 50/50)
à l'aide d'une éprouvette et les verser dans la burette ;
 Récupérer le contenu de la burette dans un autre tube à essai propre et étiqueté. Soit F 2
cette fraction.
Figure III.5 : Colonne chromatographique
Chaque tube contenant les fractions récupérées est fermé avec du papier aluminium puis avec le
bouchon et le tout est enrobé avec du téflon en ruban pour éviter toute contamination ou perte
d’échantillon. Les tubes sont enfin conservés au frais et prêts à être analyser dans la SFUV.
5.1.4. Analyse des hydrocarbures polyaromatiques (HAP)
5.1.4.1. Principe de la spectrofluorescence UV (SFUV)
Le principe de cette méthode est fondée sur les analogies que présentent les spectres
d'excitation et d'émission de fluorescence des substances organiques non polaires extraites de
l'eau de mer et ceux des substances entrant dans la composition de la plupart des pétroles bruts et
des fuels résiduels. Ces dernières se caractérisent par une excitation maximale au voisinage de
310 nm et une crête large vers 360 nm dans le spectre d'émission, les deux phénomènes étant dus
essentiellement au fait qu'il s'agit d'un mélange complexe de composés contenant deux ou
plusieurs noyaux aromatiques (COI, 1983).