Chapitre III : MATERIEL ET METHODES
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5.1.2.2. Concentration sous jet d’azote
Les 10 ml d’échantillon récupérés du Rotavapor sont ensuite transvasés dans un tube à essai puis
passés à la deuxième concentration qui est une évaporation à sec sous jet d’Azote jusqu’à avoir
un volume de 3 à 5 ml.
C’est une étape très délicate vu le faible volume final récupéré et vu les risques de perte
d'échantillon au-dessous d’un volume de 200 μl comme le souligne le protocole de la COI (COI,
1983).
5.1.3. Purification / fractionnement
Les échantillons concentrés contiennent deux fractions, la première constitue la fraction
Aliphatique (F 1 ) qui présente les hydrocarbures légers, alors que la deuxième (F 2 ) présente les
hydrocarbures polyaromatiques.
Après l'étape de concentration, vient alors l'étape de "purification-fractionnement" qui se fait
dans une colonne chromatographiques ouverte. L’objet de cette étape est :
 L’élimination des lipides Co-extraits avec les hydrocarbures (purification) ;
 La séparation des deux fractions F 1 et F 2 (fractionnement).
Les adsorbants utilisés dans cette opération sont l’alumine pour la purification et le gel de silice
pour le fractionnement.
5.1.3.1. Préparation de la colonne chromatographique
 Peser sur une balance de précision 5g de gel de silice et 5g d’alumine dans des béchers
propres notés respectivement « S » et « A » ;
 Placer la burette avec son robinet sur la potence ;
 Prendre un peu de laine de verre à l'aide d'une pince et la mettre au fond de la burette à
l'aide d'une tige sans trop la tasser ;
 Verser un peu d’Hexane pour vérifier le bon fonctionnement de la burette ;
 Verser le contenu du bécher S puis A dans la burette et faire tasser à chaque fois en
tapant légèrement la burette avec la spatule ;
 Ajouter une pincé de Na 2 SO 4 dans la burette et faire tasser ;
 Vider la burette de l'Hexane en laissant environ 1 ml au-dessus des adsorbants afin
d'éviter leur séchage.
5.1.3.2. Purification et fractionnement
 Mesurer sous la hotte 20 ml d’hexane à l'aide d'une éprouvette ;
 Agiter l’échantillon contenu dans le tube à essai sur un agitateur mécanique ;