Chapitre II
MATERIEL ET METHODES
39
Figure II.11: Principe de la coloration de Gram.
4.5.3.2 Identification des souches bactériennes par des tests biochimiques
L'identification biochimique est une série d’examens qui permet d'identifier une bactérie en
s'appuyant sur ces caractères biochimiques.
4.5.3.3 Le milieu TSI (Triple SugarIron)
Le milieu TSI est un milieu contenant du glucose, du saccharose et du citrate de fer ammoniacal. C'est un
milieu qui permet la recherche de plusieurs caractères biochimiques
a. Principe
La gélose TSI est utilisée pour l’identification présomptive des entérobactéries basée sur la
fermentation du glucose, du lactose, du saccharose et sur la production de gaz et d’H 2 S.
b. Procédure
- Prélever à l’aide d’une pipette pasteur stérile la colonie suspecte ;
- Ensemencer abondamment la pente de la gélose par des stries serrées ;
- Effectuer par la suite avec la même pipette pasteur, une piqûre centrale dans le culot,
jusqu’à 3 à 5 mm du fond du tube.
- Laisser les bouchons légèrement dévissés.
- Incuber 24 à 48 heures à 35-37°C.
COLORATION DE GRAM
Bactéries Gram +
Étapes
Bactéries Gram -
Fixation par la Chaleur ou l’Alcool
Coloration au Violet de Gentiane
Mordançage au Lugol
Décoloration à l’Alcool
Contre-Coloration à la Fuchsine