Chapitre 02 :
Matérieles et Méthodes
24
- Laisser refroidir à température ambiante.
- Centrifuger 1 min, pour faire tomber les fibres de verres.
- Centrifuger à nouveau 5 à 10 min a 3000-4000 tr/min (les tubes doivent rester boucher pour
éviter l’évaporation). Dans un solvant qui assure l’extraction des pigments ; puis on mesure
c) Mesure d’absorbance : Méthode de LORENZEN
Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve de spectromètre ; on évite
l’entrainement de fibres de verre en aspirant l’extrait à l’aide, par exemple, d’une
seringue de verre.
Mettre la cuve en place et s’assurer de son positionnement correct.
Mesurer les absorbances brutes des extraits non acidifiés aux longueurs d’ondes de
665 et 750 nm, soit Ab665
na
et Ab750
na
. La mesure à 750 nm doit être restée inférieur à
0,005 par centimètre de trajet optique.
Acidifier par addition de 10 µl d’acide chlorhydrique 0,3 mol/l par millilitre d’extrait
(soit une goute pour environ 5 ml) directement dans la cuve et attendre 2 à 3 min.
Mesurer les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm, soit Ab665
a
et
Ab750
a
.
d) Calcule et expression des résultats :
Les absorbances brutes à 665 nm et les blancs de turbidité à 750 nm doivent être corrigés en
soustrayant les blancs des cuves puis on obtient les absorbances nettes en soustrayant les
absorbances corrigés mesurés à 750 nm des absorbances corrigées mesurées à 665 nm, c’està-dire :
Avant acidification :
A665
na = (Ab665
na
– bc665) – (Ab750
na
– bc750)
Après acidification:
A665
a = (Ab665
a
– bc665) – (Ab750
a
– bc750)
Les autres données sont :
- V : volume d’eau filtrée (litres).
- v : volume de solvant d’extraction (millilitres).
- l : longueur de trajet optique de la cuve de mesure (centimètre).
- mh : masse de sédiment humide qui égale à 7g.
- ms : masse de sédiment sec qui égale à 5g.
Les concentrations de chlorophylle-a et de phéopigments a se calculent d’après les relations
suivantes :
Dans l’eau :
[Chlorophylle-a] (µg/l) = [26,7(A665
na - A665
a
)*v]/ (V*l)
[Phéopigments] (µg/l) = [26,7(1,7A665
a - A665
na
)*v]/ (V*l)
Matérieles et Méthodes
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- Laisser refroidir à température ambiante.
- Centrifuger 1 min, pour faire tomber les fibres de verres.
- Centrifuger à nouveau 5 à 10 min a 3000-4000 tr/min (les tubes doivent rester boucher pour
éviter l’évaporation). Dans un solvant qui assure l’extraction des pigments ; puis on mesure
c) Mesure d’absorbance : Méthode de LORENZEN
Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve de spectromètre ; on évite
l’entrainement de fibres de verre en aspirant l’extrait à l’aide, par exemple, d’une
seringue de verre.
Mettre la cuve en place et s’assurer de son positionnement correct.
Mesurer les absorbances brutes des extraits non acidifiés aux longueurs d’ondes de
665 et 750 nm, soit Ab665
na
et Ab750
na
. La mesure à 750 nm doit être restée inférieur à
0,005 par centimètre de trajet optique.
Acidifier par addition de 10 µl d’acide chlorhydrique 0,3 mol/l par millilitre d’extrait
(soit une goute pour environ 5 ml) directement dans la cuve et attendre 2 à 3 min.
Mesurer les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm, soit Ab665
a
et
Ab750
a
.
d) Calcule et expression des résultats :
Les absorbances brutes à 665 nm et les blancs de turbidité à 750 nm doivent être corrigés en
soustrayant les blancs des cuves puis on obtient les absorbances nettes en soustrayant les
absorbances corrigés mesurés à 750 nm des absorbances corrigées mesurées à 665 nm, c’està-dire :
Avant acidification :
A665
na = (Ab665
na
– bc665) – (Ab750
na
– bc750)
Après acidification:
A665
a = (Ab665
a
– bc665) – (Ab750
a
– bc750)
Les autres données sont :
- V : volume d’eau filtrée (litres).
- v : volume de solvant d’extraction (millilitres).
- l : longueur de trajet optique de la cuve de mesure (centimètre).
- mh : masse de sédiment humide qui égale à 7g.
- ms : masse de sédiment sec qui égale à 5g.
Les concentrations de chlorophylle-a et de phéopigments a se calculent d’après les relations
suivantes :
Dans l’eau :
[Chlorophylle-a] (µg/l) = [26,7(A665
na - A665
a
)*v]/ (V*l)
[Phéopigments] (µg/l) = [26,7(1,7A665
a - A665
na
)*v]/ (V*l)