ІІ. Matériel et méthodes
29
Réaliser une suspension bactérienne faible
Inoculation de la galerie
Remplir les tubules et les cupules des tests du type CIT
Remplir les tubules des tests du type ADH et remplir la cupule avec de l’huile de paraffine, pour créer
l’anaérobiose.
Remplir uniquement les tubules des tests restants
Incuber à 18 à 24 heures.
Remarque : il est important de veiller à ne pas créer de bulles lors de l’inoculation qui pourraient
fausser le résultat. De plus l’apparition de bulles après incubation apportera un caractère
d’identification supplémentaire (GAZ+).
c-Lecture de la galerie :
Réaliser les tests nécessitant l’addition de réactifs : Test VP, TDA, IND.
Après codification des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on se référant à un
catalogue analytique fourni par Biomérieux où l’identification est donnée avec un pourcentage et une
appréciation (Biomérieux).
ІІ.6.Étude de la résistance aux antibiotiques par Antibiogramme
a- Principe
L’étude de la sensibilité des souches aux antibiotiques a été réalisée par la méthode de diffusion en
milieu gélosé (CASFM, 2018). Cette technique consiste à déposer des disques imprégnés
d’antibiotiques à la surface d’un milieu de culture préalablement ensemencé avec une dilution calibrée
de la bactérie à tester. Un gradient inversement proportionnel à la distance par rapport aux disques
s’établit dans la gélose. La croissance des bactéries dessine des halos d’inhibition au tour du disque.
La croissance bactérienne s’arrête en présence de la concentration minimale d’inhibition autour du
disque d’antibiotique (Courvalin et al. 1985).
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Réaliser une suspension bactérienne faible
Inoculation de la galerie
Remplir les tubules et les cupules des tests du type CIT
Remplir les tubules des tests du type ADH et remplir la cupule avec de l’huile de paraffine, pour créer
l’anaérobiose.
Remplir uniquement les tubules des tests restants
Incuber à 18 à 24 heures.
Remarque : il est important de veiller à ne pas créer de bulles lors de l’inoculation qui pourraient
fausser le résultat. De plus l’apparition de bulles après incubation apportera un caractère
d’identification supplémentaire (GAZ+).
c-Lecture de la galerie :
Réaliser les tests nécessitant l’addition de réactifs : Test VP, TDA, IND.
Après codification des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on se référant à un
catalogue analytique fourni par Biomérieux où l’identification est donnée avec un pourcentage et une
appréciation (Biomérieux).
ІІ.6.Étude de la résistance aux antibiotiques par Antibiogramme
a- Principe
L’étude de la sensibilité des souches aux antibiotiques a été réalisée par la méthode de diffusion en
milieu gélosé (CASFM, 2018). Cette technique consiste à déposer des disques imprégnés
d’antibiotiques à la surface d’un milieu de culture préalablement ensemencé avec une dilution calibrée
de la bactérie à tester. Un gradient inversement proportionnel à la distance par rapport aux disques
s’établit dans la gélose. La croissance des bactéries dessine des halos d’inhibition au tour du disque.
La croissance bactérienne s’arrête en présence de la concentration minimale d’inhibition autour du
disque d’antibiotique (Courvalin et al. 1985).