MATERIEL ET METHODES
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Les résultats sont interprétés selon les diamètres d’inhibitions indiquées dans le communiqué
de Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie (2008).
Figure 9 : Schéma de la disposition des béta-lactamines (Vedel, 1997).
IV.6. Détection des béta-lactamases inductibles : test d’antagonisme
La disposition de Vedel (1997) a permis d’avoir à la fois la résistance aux antibiotiques ainsi
que de détecter la production de certaines enzymes tels que les céphalosporinases inductibles.
Elles sont mises en évidence par l’apparition d’une image d’antagonisme entre un antibiotique
inducteur (Céfoxitine ou Imipénème) et un antibiotique actif (Céfépime, Cefsulodine), qui se
traduit par la diminution de l’activité de la béta-lactamine initialement active (Vedel, 2005).
IV.7. Détection des béta-lactamases à spectre élargi (BLSE) : test de synergie
Le phénotype BLSE est mis en évidence par le test de synergie (Double Disk Synergy Test,
DDST) (Jarlier et al., 1988) réalisé de manière systématique lors de l’antibiogramme.
L’apparition d’une image de synergie entre au moins une céphalosporine de 3
ème génération
(C3G) et/ou l’Aztréonam et un inhibiteur de béta-lactamines tel que l’acide clavulanique,
déposés à 3 cm de distance centre à centre, indique la production de béta-lactamase à spectre
élargi. La synergie se traduit par une apparition ou une augmentation de sensibilité vis-à-vis
d’une céphalosporine de 3
ème génération et/ou l’aztréonam du coté de l’inhibiteur, l’acide
clavulanique (Jarlier et al., 1988 ; Vedel, 2005).
IV.8. Transfert génétique par conjugaison en milieu solide
A partir de cultures de 18 heures sur BHIB, les souches donatrices (un volume) et
réceptrices (deux volumes) sont mises en contact sur une gélose Mueller-Hinton après
centrifugation du mélange à 12000 rpm pendant 2mn et remise en suspension du culot dans de
l’eau physiologique stérile. Les souches réceptrices utilisées sont E. coli J-53 résistante à la
rifampicine (RA
R ) ou E.coli K12 résistante à l’acide nalidixique (NA
R ). Elles sont
dépourvues de plasmides et possédant dans ce cas un caractère de résistance chromosomique
à la Rifampicine ou à l’Acide Nalidixique auxquels la donatrice est sensible. Après une nuit
de contact entre les souches parentales, la culture mixte est mise en suspension dans de l’eau
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Les résultats sont interprétés selon les diamètres d’inhibitions indiquées dans le communiqué
de Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie (2008).
Figure 9 : Schéma de la disposition des béta-lactamines (Vedel, 1997).
IV.6. Détection des béta-lactamases inductibles : test d’antagonisme
La disposition de Vedel (1997) a permis d’avoir à la fois la résistance aux antibiotiques ainsi
que de détecter la production de certaines enzymes tels que les céphalosporinases inductibles.
Elles sont mises en évidence par l’apparition d’une image d’antagonisme entre un antibiotique
inducteur (Céfoxitine ou Imipénème) et un antibiotique actif (Céfépime, Cefsulodine), qui se
traduit par la diminution de l’activité de la béta-lactamine initialement active (Vedel, 2005).
IV.7. Détection des béta-lactamases à spectre élargi (BLSE) : test de synergie
Le phénotype BLSE est mis en évidence par le test de synergie (Double Disk Synergy Test,
DDST) (Jarlier et al., 1988) réalisé de manière systématique lors de l’antibiogramme.
L’apparition d’une image de synergie entre au moins une céphalosporine de 3
ème génération
(C3G) et/ou l’Aztréonam et un inhibiteur de béta-lactamines tel que l’acide clavulanique,
déposés à 3 cm de distance centre à centre, indique la production de béta-lactamase à spectre
élargi. La synergie se traduit par une apparition ou une augmentation de sensibilité vis-à-vis
d’une céphalosporine de 3
ème génération et/ou l’aztréonam du coté de l’inhibiteur, l’acide
clavulanique (Jarlier et al., 1988 ; Vedel, 2005).
IV.8. Transfert génétique par conjugaison en milieu solide
A partir de cultures de 18 heures sur BHIB, les souches donatrices (un volume) et
réceptrices (deux volumes) sont mises en contact sur une gélose Mueller-Hinton après
centrifugation du mélange à 12000 rpm pendant 2mn et remise en suspension du culot dans de
l’eau physiologique stérile. Les souches réceptrices utilisées sont E. coli J-53 résistante à la
rifampicine (RA
R ) ou E.coli K12 résistante à l’acide nalidixique (NA
R ). Elles sont
dépourvues de plasmides et possédant dans ce cas un caractère de résistance chromosomique
à la Rifampicine ou à l’Acide Nalidixique auxquels la donatrice est sensible. Après une nuit
de contact entre les souches parentales, la culture mixte est mise en suspension dans de l’eau