Chapitre III
Matériel et Méthode
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3.2.1.6.Analyses microbiologiques
Les germes test recherchés sont les coliformes totaux, fécaux, E. coli, streptocoques fécaux,
les staphylocoques, les vibrions et les salmonelles. La méthode utilisée c’est la filtration sur
membrane.
Matériels utilisés
 Dispositif de filtration sous vide de marque Sartorius,
 Membranes de filtration millipore,
 Milieux de culture, boites de pétrie,
 Bec Bunsen et pinces.
Mode opératoire
La réalisation de la technique de filtration sur membrane a été faite selon les
recommandations suivantes :
 Lavage et stérilisation de l’équipement de filtration pour le flambage.
 Mise en place de la pompe à vide.
 Prendre une membrane filtrante stérile près du bord à l’aide d’une pince stérilisée par
flambage à la flamme et la déposer sur le support du filtre.
 Placer l’entonnoir sur le support et le fixer fermement.
 Verser dans chaque entonnoir un volume 100 ml de d’échantillon bien homogénéisé.
 Faire le vide jusqu’ à filtration totale de l’échantillon.
 Retirer l’entonnoir ;
- Pour les coliformes, les streptocoques, les staphylocoques et les mycètes ;
Déposer la membrane filtrante à l’aide d’une pince stérile sur la gélose ou le milieu de culture
choisis selon les germes recherchés.
- Pour les salmonelles et les vibrions ;
Déposer la membrane dans un flacon contenant le milieu d’enrichissement.
 Inscrire sur les boites de pétri et les flacons, le numéro de l’échantillon et le volume
filtré.
 Incuber les boites de pétrie et les flacons à température optimale de croissance du
germe recherché.
 Flambage du dispositif par le bec benzène après chaque échantillon filtré afin d’éviter
toute contamination possible.
3.2.1.6.1. Dénombrement des Coliformes, Streptocoques fécaux et des staphylocoques
 Dénombrement des Coliformes totaux et Coliformes thermotolérants «fécaux»
Cette méthode conduit à un dénombrement présomptif des coliformes totaux et des coliformes
fécaux sur un milieu gélosé lactosé (gélose au tergitol). Les boites destinées à la recherche des
coliformes totaux ont été incubées à 37°C pendant 24h à 48h, alors que celles destinées à la
recherche des coliformes fécaux ont été incubées à 44°C pendant 24h à 48h.