Chapitre III
Matériel et Méthode
35
Avec;
- I 0 , I : Intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant,
- A : Absorbance ou densité optique,
- ε : Coefficient d’extinction moléculaire,
- L : trajet optique (épaisseur du milieu absorbant),
- C : Concentration du milieu absorbant.
3.2.1.5.3. Analyse automatique des sels nutritifs
Dosage des nitrites :
Les nitrites (NO 2
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide
pH<2. Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé
azoïque de couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider & Robinson., 1952).
Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO 3
-
) en nitrites (NO 2
-
) par le passage de
l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (Wood et al.,
1967). Les nitrites (en réalité NO 2 - + NO 3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon
la méthode précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (Rodier et al., 1996).
Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bain-marie),
les ions orthophosphates (PO 4
3) réagissentavec le molybdate d’ammonium pour former un
complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique (Murphy et
Riley, 1962). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption à 880 nm.
Dosage du silicium dissous
Dans l’eau de mer, le silicium dissous se trouve à 95 % sous forme d’acide orthosilicique
(Si(OH) 4 ) (Aminot & Chaussepied, 1983). Cette forme réagit avec le molybdate
d’ammonium en milieu acide pour former un complexe silicomolybdique qui sera réduit par
l’acide ascorbique en un composé coloré en bleu absorbant à 810 nm. On y ajoute l’acide
oxalique pour éviter les interférences des phosphates.
3.2.1.5.4. Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour
chaque élément à analyser (Annexe II).
Les droites d’étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en utilisant les
concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic correspondantes.
Matériel et Méthode
35
Avec;
- I 0 , I : Intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant,
- A : Absorbance ou densité optique,
- ε : Coefficient d’extinction moléculaire,
- L : trajet optique (épaisseur du milieu absorbant),
- C : Concentration du milieu absorbant.
3.2.1.5.3. Analyse automatique des sels nutritifs
Dosage des nitrites :
Les nitrites (NO 2
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide
pH<2. Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé
azoïque de couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider & Robinson., 1952).
Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO 3
-
) en nitrites (NO 2
-
) par le passage de
l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (Wood et al.,
1967). Les nitrites (en réalité NO 2 - + NO 3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon
la méthode précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (Rodier et al., 1996).
Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bain-marie),
les ions orthophosphates (PO 4
3) réagissentavec le molybdate d’ammonium pour former un
complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique (Murphy et
Riley, 1962). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption à 880 nm.
Dosage du silicium dissous
Dans l’eau de mer, le silicium dissous se trouve à 95 % sous forme d’acide orthosilicique
(Si(OH) 4 ) (Aminot & Chaussepied, 1983). Cette forme réagit avec le molybdate
d’ammonium en milieu acide pour former un complexe silicomolybdique qui sera réduit par
l’acide ascorbique en un composé coloré en bleu absorbant à 810 nm. On y ajoute l’acide
oxalique pour éviter les interférences des phosphates.
3.2.1.5.4. Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour
chaque élément à analyser (Annexe II).
Les droites d’étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en utilisant les
concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic correspondantes.